Question

【題目】我國基因工程藥物的研制和生產發(fā)展迅猛，下圖是利用基因工程方法生產重組人生長激素的示意圖。圖中質粒表示基因工程中經常選用的載體—pBR322質粒，Ampr表示青霉素抗性基因，Tetr表示四環(huán)素抗性基因。根據上圖回答下列問題（限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ切割形成的末端均不相同）：

（1）過程②必需的酶是 ，過程④必需的酶是 。⑤過程中為提高成功率，常用 溶液處理大腸桿菌。

（2）如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ對質粒pBR322進行切割，用一種酶、兩種酶和三種酶分別切割時，則形成的DNA片段共 種，其中含有完整四環(huán)素抗性基因的DNA片段的比例是 。

（3）如果只用限制酶PstI切割目的基因和質粒pBR322，完成過程④、⑤后，將三角瓶內的大腸桿菌（不含Ampr、Tetr抗性質粒）先接種到甲培養(yǎng)基上，形成菌落后用無菌牙簽挑取甲上的單個菌落，分別接種到乙和丙兩個培養(yǎng)基的相同位置上，一段時間后，菌落的生長狀況如圖所示。接種到甲培養(yǎng)基上的目的是篩選 的大腸桿菌，含有目的基因的大腸桿菌在乙、丙培養(yǎng)基上的存活狀態(tài)分別是 ， 。

Answer 1

【答案】

（1）(逆)反轉錄酶 DNA連接酶 CaCl2 （2）9 1/3

（3）含四環(huán)素抗性基因 在乙中不能存活 在丙中存活

【解析】

試題分析：（1）過程②人生長激素信使RNA形成cDNA，表示逆轉錄，需要逆轉錄酶；過程④質粒和基因連接形成重組質粒．需要DNA連接酶發(fā)揮作用；⑤過程為轉化，需要CaCl2使大腸桿菌處于易于吸收外界DNA的感受態(tài)。（2）PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ分3種酶分別用1，2，3表示，一種酶酶切時，一共可以得到3種不同長片段；兩種酶酶切時，可得到1-2，2-1，2-3，3-2，1-3，3-1六種片段；三種酶酶切，可得到1-2，2-3，3-1三種片段，與前面重復，因此一種可形成9種片段，其中含有完整四環(huán)素抗性的有3種，單獨用1酶切，單獨用2酶切，1和2同時酶切得到的片段，占總數的1/3。（3）在甲中能生長的是具有四環(huán)素抗性的細菌，含有四環(huán)素抗性基因；與丙相比，乙培養(yǎng)基中少了兩個菌落，說明丙培養(yǎng)基中這兩個菌落中的大腸桿菌成功導入了重組質粒，而且目的基因插入質粒后，破壞了青霉素抗性基因，使含有目的基因的大腸桿菌不能在含有青霉素的乙培養(yǎng)基上生長，但四環(huán)素基因是完好的，則含有目的基因的大腸桿菌能在含有四環(huán)素的丙培養(yǎng)基上生長。