Question

【題目】為獲得果膠酶高產(chǎn)菌株，科研人員進行了下列分離、篩選、鑒定工作。

（1）為分離果膠酶產(chǎn)生菌，科研人員配制了下表所示成分的培養(yǎng)基，該表空白處的兩種成分是 。制備的培養(yǎng)基常用 法進行滅菌。

K2HPO4	MgSO4	NaNO3	FeSO4	瓊脂
0．1g	0．5g	3g	0．01g	2g	15g	加至1L

（2）科研人員將采集的果園土壤放入無菌水中，震蕩混勻，制成懸液。為獲得較均勻分布的單菌落，還需要將懸液進行 ,用 法接種于固體培養(yǎng)基上。接種后的培養(yǎng)基 狀態(tài)放人培養(yǎng)箱。

（3）選擇單菌落數(shù)目適宜的培養(yǎng)基，加入一定濃度的剛果紅溶液（果膠與剛果紅結(jié)合后顯紅色），一段時間后洗去培養(yǎng)基表面的剛果紅溶液，觀察并比較菌落和 直徑的比值，篩選果膠酶高產(chǎn)菌株。

（4）將獲得的菌株進行液體培養(yǎng)后，從培養(yǎng)液的 （填“上清液”或“沉淀物”）獲得粗提的果膠酶。將一定量的粗提果膠酶與適量果膠溶液混合，一定時間后測定吸光值來測定酶活性。進行吸光值測定時，需將 與等量果膠溶液混合，作為實驗的對照。

Answer 1

【答案】（1）果膠和蒸餾水 高壓蒸汽滅菌

（2）梯度稀釋（或系列稀釋） （稀釋）涂布平板 倒置

（3）水解（或透明）

（4）上清液 等量失活的粗提果膠酶

【解析】

試題分析：（1）依題意可知：該實驗的目的是分離果膠酶產(chǎn)生菌，因此培養(yǎng)基中需要加入果膠，在配制過程中需用蒸餾水定容，所以該表空白處的兩種成分是果膠和蒸餾水。制備的培養(yǎng)基常用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌。

（2）為獲得較均勻分布的單菌落，還需要將懸液進行梯度稀釋，并用稀釋涂布平板法接種于固體培養(yǎng)基上。接種后的培養(yǎng)基倒置狀態(tài)放入培養(yǎng)箱，以防止培養(yǎng)皿蓋上凝結(jié)的水珠落入培養(yǎng)基造成污染。

（3）已知果膠與剛果紅結(jié)合后顯紅色。果膠酶產(chǎn)生菌分泌的果膠酶能夠?qū)⑴囵B(yǎng)基中的果膠水解，當(dāng)單菌落數(shù)目適宜的培養(yǎng)基中加入一定濃度的剛果紅溶液一段時間后，洗去培養(yǎng)基表面的剛果紅溶液，因菌落周圍的果膠被分解，無法形成紅色的復(fù)合物而出現(xiàn)水解透明圈，所以觀察并比較菌落和水解（或透明）直徑的比值，可篩選出果膠酶高產(chǎn)菌株。

（4） 將獲得的菌株進行液體培養(yǎng)后，從培養(yǎng)液的上清液獲得粗提的果膠酶。將一定量的粗提果膠酶與適量果膠溶液混合，一定時間后測定吸光值來測定酶活性。進行吸光值測定時，需將等量失活的粗提果膠酶與等量果膠溶液混合，作為實驗的對照。