Question

下面是某研究小組開展的“豬血漿某白蛋白的提取及分子量測(cè)定”研究，請(qǐng)協(xié)助完成有關(guān)問題：
材料儀器：新鮮豬血、低速冷凍離心機(jī)、透析袋、電泳儀等．
化學(xué)試劑：pH為7.4的緩沖液、檸檬酸鈉、奈氏試劑（與NH₄⁺反應(yīng)出現(xiàn)黃色或紅棕色沉淀）、飽和（NH₄）₂SO₄溶液、生理鹽水等．
實(shí)驗(yàn)步驟：
（1）樣品獲�。合蛐迈r豬血中加入

 

，靜置一段時(shí)間后取上層

 

．
（2）鹽析法粗提蛋白質(zhì)：
①向血漿中加入一定體積的飽和（NH₄）₂SO₄溶液，使（NH₄）₂SO₄的濃度達(dá)到50%，充分混合后靜置、離心，取沉淀物．
②向沉淀物中加入適量生理鹽水使之溶解，再向其中加入一定體積的飽和（NH₄）₂SO₄溶液，使（NH₄）₂SO₄的濃度達(dá)到33%，充分混合后靜置、離心，取沉淀物．
③重復(fù)步驟①、②2～3次，最后用生理鹽水將沉淀溶解即得粗提品．
鹽析粗提“血漿某白蛋白”的主要原理是

 

，重復(fù)步驟①、②的主要目的是

 

．
（3）透析除鹽：將粗提品裝入透析袋，以pH為7.4的緩沖液作透析液，每隔4h更換一次透析液，每次更換前利用奈氏試劑檢測(cè)透析液中NH₄⁺的量．利用緩沖液作透析液的目的是

 

．檢測(cè)中，若觀察到透析液

 

時(shí)，即可終止透析．
（4）凝膠色譜法分離：透析后的樣品經(jīng)凝膠柱洗脫，獲得純凈血漿某白蛋白樣品．
（5）分子量測(cè)定：化學(xué)物質(zhì)SDS能使蛋白質(zhì)變性，解聚成單條肽鏈．在聚丙烯酰胺凝膠電泳中加入一定量的SDS，電泳遷移率完全取決于肽鏈的分子大�。�如圖為本實(shí)驗(yàn)中用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定血漿某白蛋白的結(jié)果．根據(jù)電泳結(jié)果，某同學(xué)得出“提取的血漿某白蛋白有兩條肽鏈”的結(jié)論，這種說法可靠嗎？理由是

 

．

Answer 1

考點(diǎn)：蛋白質(zhì)的提取和分離

專題：

分析：鹽析法是指在藥物溶液中加入大量的無(wú)機(jī)鹽，使某些高分子物質(zhì)的溶解度降低沉淀析出，而與其他成分分離的方法．鹽析法主要用于蛋白質(zhì)的分離純化，常作鹽析的無(wú)機(jī)鹽有氯化鈉、硫酸鈉、硫酸鎂、硫酸銨等．

解答： 解：實(shí)驗(yàn)步驟：
（1）樣品獲�。合蛐迈r豬血中加入（適量的）檸檬酸鈉以防止血液凝固，靜置一段時(shí)間后取上層血漿．
（2）鹽析法粗提蛋白質(zhì)：
分析實(shí)驗(yàn)步驟可知，鹽析粗提“血漿某白蛋白”的主要原理是該血漿白蛋白在50%和33%的（NH₄）₂SO₄溶液中溶解度低，重復(fù)步驟①、②的主要目的是除去更多的雜蛋白．
（3）利用緩沖液作透析液的目的是維持pH值的相對(duì)穩(wěn)定，防止pH變化對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)造成破壞．檢測(cè)中，若觀察到透析液不出現(xiàn)黃色或紅棕色沉淀時(shí)，說明小分子血漿蛋白已去除干凈，即可終止透析．
（5）不可靠，由圖可知，只能得出提取的血漿某白蛋白含有兩種大小不同的肽鏈，而不一定是只有兩條．
故答案為：
（1）（適量的）檸檬酸鈉     血漿
（2）該血漿白蛋白在50%和33%的（NH₄）₂SO₄溶液中溶解度低    除去更多的雜蛋白
（3）防止pH變化對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)造成破壞   不出現(xiàn)黃色或紅棕色沉淀
（5）不可靠，只能得出提取的血漿某白蛋白含有兩種大小不同的肽鏈，不一定是兩條

點(diǎn)評(píng)：本題考查蛋白質(zhì)的提取及分子量的測(cè)定，對(duì)相關(guān)實(shí)驗(yàn)方法的掌握是解題的關(guān)鍵．