Question

【題目】自然界中有很多種微生物，尚未能分離純化培養(yǎng)，科研人員開發(fā)了新的微生物分離 技術(shù)以篩選微生物。

（1）配制培養(yǎng)基并分離微生物的步驟是：計(jì)算→稱量→溶化→調(diào)pH→______________→倒平板→______________→培養(yǎng)。篩選微生物的一般思路是，根據(jù)表型特征利用____培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。

（2）若某種微生物沒有明顯表型特征時(shí)，就無(wú)法通過上述方法篩選，科研人員通過圖所示的流程進(jìn)行篩選。

①據(jù)圖分析，科研人員利用目標(biāo)微生物編碼膜蛋白的____________________，構(gòu)建表達(dá)載體，并導(dǎo)入用________________處理的大腸桿菌細(xì)胞中，獲取大量膜蛋白。

②用獲取的膜蛋白作為抗原，利用兔子制備單克隆抗體的具體流程是：_____。

（3）將上述帶有熒光的單克隆抗體與待分離微生物群體混合，目的是_____目標(biāo)微生物。 用流式細(xì)胞儀分離不同熒光強(qiáng)度的細(xì)胞，結(jié)果如圖2所示。對(duì)結(jié)果進(jìn)行比較，應(yīng)從區(qū)域_____（選填圖中數(shù)字）的細(xì)胞中篩選目標(biāo)微生物。

Answer 1

【答案】（高壓蒸汽）滅菌 接種 選擇 基因序列 CaCl2 用膜蛋白作為抗原多次免疫兔子，取脾臟中的B淋巴細(xì)胞（或漿細(xì)胞）與骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選得到單個(gè)分泌抗膜蛋白抗體的雜交瘤細(xì)胞，進(jìn)行克隆培養(yǎng) 標(biāo)記 ②

【解析】

單克隆抗體的制備過程：首先用特定抗原注射小鼠體內(nèi)，使其發(fā)生免疫，小鼠體內(nèi)產(chǎn)生具有免疫能力的B淋巴細(xì)胞。利用動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)將B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，單克隆抗體制備過程中的兩次篩選：第一次篩選：利用特定選擇培養(yǎng)基篩選，獲得雜交瘤細(xì)胞，即AB型細(xì)胞（A為B淋巴細(xì)胞，B為骨髓瘤細(xì)胞），不需要A、B、AA、BB型細(xì)胞。第二次篩選：利用多孔板法和抗原-抗體雜交法篩選，獲得產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞。最終篩選獲得的雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)是能無(wú)限增殖并能分泌特異性抗體，最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中提取單克隆抗體。

（1）制備固體平板培養(yǎng)基的主要操作步驟是：計(jì)算→稱量→溶化→調(diào)pH→滅菌→倒平板→接種→培養(yǎng)。選擇培養(yǎng)基可以抑制其它微生物生長(zhǎng)，而有利于目的菌的生長(zhǎng)，所以篩選微生物一般使用選擇培養(yǎng)基。

（2）①據(jù)圖分析，科研人員利用基因工程將目標(biāo)微生物編碼膜蛋白的基因序列，構(gòu)建基因表達(dá)載體，并導(dǎo)入用CaCl2處理的大腸桿菌細(xì)胞中，使目的基因增殖并表達(dá)可獲取大量膜蛋白。

②用獲取的膜蛋白作為抗原，利用兔子制備單克隆抗體的具體流程是：用膜蛋白作為抗原多次免疫兔子，使其體內(nèi)產(chǎn)生針對(duì)該膜蛋白的免疫細(xì)胞，取脾臟中已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞（或漿細(xì)胞）與骨髓瘤細(xì)胞融合，通過選擇培養(yǎng)基的篩選和抗體檢測(cè)可篩選得到單個(gè)分泌抗膜蛋白抗體的雜交瘤細(xì)胞，并進(jìn)行體內(nèi)或體外的克隆培養(yǎng)。

（3）利用抗體和抗原特異性結(jié)合的特性，可將上述帶有熒光的單克隆抗體與待分離微生物群體混合，目的是標(biāo)記目標(biāo)微生物。加入抗體后熒光性強(qiáng)的場(chǎng)所說明含有目標(biāo)微生物多，所以據(jù)圖可知應(yīng)從區(qū)域②的細(xì)胞中篩選目標(biāo)微生物。