Question

【題目】生物——選修3:現(xiàn)代生物科技專題]

基因工程的設(shè)計和操作中，啟動子是運載體的重要組成部分。下圖是一種克隆啟動子的辦法，請據(jù)圖分析回答：

（1）啟動子是__________識別和結(jié)合的部位。若要獲得啟動子的堿基序列不能依據(jù)基因表達產(chǎn)物推知，原因是_________________________。

（2）過程①、③分別使用的限制酶是____________________________。

（3）過程④的原理是__________________，需要用到的工具酶是______________。

（4）過程⑤中克隆的啟動子與外源基因連接時，根據(jù)_________________設(shè)計引物a。

Answer 1

【答案】 RNA聚合酶 基因中啟動子的堿基序列不能被轉(zhuǎn)錄 BamHⅠ/HindⅢ DNA雙鏈復(fù)制 Taq酶等熱穩(wěn)定聚合酶 外源基因的核苷酸序列

【解析】試題分析：圖中外源DNA分子上含有限制酶BamHⅠ、HindⅢ、MboⅠ、HindⅢ的識別序列和切割位點，且限制酶BamHⅠ和MboⅠ的識別序列相同，用限制酶HindⅢ、MboⅠ和HindⅢ切割都會破壞目的基因．①表示獲取目的基因的過程；②表示基因表達載體的構(gòu)建過程；③表示將基因表達載體中的目的基因切開；④表示采用PCR技術(shù)體外擴增目的基因。

（1）啟動子是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，由于基因中啟動子的堿基序列不能被轉(zhuǎn)錄，故啟動子的堿基序列不能依據(jù)基因表達產(chǎn)物推知。

（2）含有目的基因的外源DNA分子上含有限制酶BamHⅠ、HindⅢ、MboⅠ、HindⅢ的識別序列和切割位點，但是用限制酶HindⅢ、MboⅠ和HindⅢ切割都會破壞目的基因，所以過程①應(yīng)選擇限制酶BamHⅠ，而限制酶BamHⅠ和MboⅠ的識別序列相同，所以過程③中要將基因表達載體中的目的基因切開，應(yīng)選擇位于目的基因上的另一個限制酶HindⅢ。

（3）過程④表示采用PCR技術(shù)體外擴增目的基因的過程，原理是DNA雙鏈復(fù)制，該過程在高溫條件下進行，因此需要使用耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）。

（5）克隆的啟動子與外源基因連接時，根據(jù)外源基因的核苷酸序列設(shè)計引物a。