Question

【題目】某同學(xué)用新鮮的泡菜濾液為實(shí)驗(yàn)材料純化乳酸菌。分離純化所用的固體培養(yǎng)基因含有碳酸鈣而呈不透明狀，而乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣。請(qǐng)回答下列問題：

（1）實(shí)驗(yàn)室用于培養(yǎng)細(xì)菌的培養(yǎng)基含有水、碳源、______，若培養(yǎng)乳酸菌，則還需要向培養(yǎng)基中添加_______。培養(yǎng)基配制和菌時(shí)，滅菌與調(diào)節(jié)pH的先后順序是_______。

（2）分離純化乳酸菌時(shí)，首先要對(duì)泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋，需要進(jìn)行梯度稀釋的原因是________。在分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用可能是中和乳酸和__________。分離純化時(shí)應(yīng)挑選出_________的菌落作為候選菌。

（3）在涂布平板時(shí)，滴加到培養(yǎng)基表面的菌懸液量不宜過多的原因是_____________________。

Answer 1

【答案】氮源和無機(jī)鹽 維生素 先調(diào)節(jié)pH，后滅菌 泡菜濾液中乳酸菌的濃度高，直接培養(yǎng)很難分離得到單菌落 鑒別乳酸菌 透明圈較大 保證涂布后可分離出單一菌落

【解析】

培養(yǎng)基的成分主要包括水、無機(jī)鹽、碳源氮源，培養(yǎng)微生物時(shí)還需要滿足微生物生長對(duì)pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。微生物常見的接種的方法：①平板劃線法:將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長 ，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。②稀釋涂布平板法:將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。

（1）實(shí)驗(yàn)室用于培養(yǎng)細(xì)菌的培養(yǎng)基一般含有氮源、碳源、水和無機(jī)鹽，若培養(yǎng)乳酸菌，則還需要向培養(yǎng)基中添加維生素。培養(yǎng)基配制和菌時(shí)，滅菌與調(diào)節(jié)pH的先后順序是先要調(diào)節(jié)pH值，再滅菌，如果先滅菌再調(diào)節(jié)pH可能造成培養(yǎng)基的污染。

（2）分離純化乳酸菌時(shí)，首先要對(duì)泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋，需要進(jìn)行梯度稀釋的原因是在稀釋度足夠高的菌液里,聚集在一起的乳酸菌將被分散成單個(gè)細(xì)胞,從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落。在分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用有中和乳酸菌代謝過程中產(chǎn)生的乳酸和利乳酸菌的鑒別；分離純化時(shí)應(yīng)挑選出在平板上有溶鈣圈（透明圈）大的菌落作為候選菌。

（3）在涂布平板時(shí)，滴加到培養(yǎng)基表面的菌懸液量不宜過多的原因是過多造成表面細(xì)菌較多，不一定能夠得到單一菌株形成的菌落。