Question

目前所用的質粒載體主要是以天然細菌質粒的各種元件為基礎重新組建的人工質粒，pBR322質粒是較早構建的質粒載體，其主要結構如圖所示。

 

(1)構建人工質粒時要有抗性基因，以便于                               。

(2)pBR322分子中有單個EcoR I限制酶作用位點，EcoR 1只能識別序列一GAATTC一，并只能在G與A之間切割。若在某目的基因的兩側各有1個EcoR I的切點，請畫出目的基因兩側被限制酶EcoR I切割后所形成的黏性末端。

                                                                      

(3)pBR322分子中另有單個的BamHI限制酶作用位點，現將經BamHI處理后的質粒與用另一種限制酶BgIⅡ處理得到的目的基因，通過DNA連接酶作用恢復___     ___ 鍵，成功的獲得了重組質粒。

 (4)為了檢測上述重組質粒是否導入原本無ampR和tetR的大腸桿菌，將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖二的菌落。再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖三的結果(空圈表示與圖二對照無菌落的位置)。與圖三空圈相對應的圖二中的菌落表現型是___       _____ ，圖三結果顯示，多數大腸桿菌導入的是___            __。

 

Answer 1

【答案】

(1)篩選(鑒別目的基因是否導入受體細胞)

  (2)

  (3)磷酸二酯鍵  

 (4)能抗氨芐青霉素，但不能抗四環(huán)素        pBR322質粒

【解析】（1）抗性基因屬于標記基因，用于鑒別目的基因是否導入受體細胞。

（2）該限制酶EcoR I的識別序列是GAATTC，并在G與A之間切割。

（3）DNA連接酶連接的是磷酸二酯鍵。

（4）與圖二對照的空圈表示能抗氨芐青霉素，但不能抗四環(huán)素的細菌，圖三結果顯示，多數細菌導入了普通質粒。