Question

I．逆轉(zhuǎn)錄病毒載體是一種表達(dá)型質(zhì)粒，結(jié)構(gòu)如圖1所示．圖上的“逆轉(zhuǎn)錄病毒序列”可以整合到動(dòng)物細(xì)胞的染色體上，不斷地表達(dá)其攜帶的目的基因．（E、F、H分別為限制酶E、F、H的酶切位點(diǎn)）．
（1）逆轉(zhuǎn)錄的模板是

 

，原料是

 

．
（2）在構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，目的基因應(yīng)插入到該質(zhì)粒的位置是

 

，此過程需使用的酶是

 

．為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌，一般需要用添加

 

的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)．獲取大量重組質(zhì)粒后，將其再轉(zhuǎn)入到某種哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，可獲得大量重組逆轉(zhuǎn)錄病毒．
Ⅱ．圖2為培育轉(zhuǎn)基因小鼠基本過程的示意圖．請回答下列問題：
（3）如A為重組質(zhì)粒溶液，將其導(dǎo)人原核期受精卵的方法是

 

；如A為重組逆轉(zhuǎn)錄病毒，還可采取

 

方法．
（4）小鼠出生后可從其尾巴提取

 

分子，通過

 

方法，可檢測出攜帶目的基因的小鼠．
（5）若目的基因進(jìn)入細(xì)胞后插入在一條染色體DNA上，那么獲得轉(zhuǎn)基因純合子小鼠的方法是

 

．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：據(jù)圖分析，基因表達(dá)載體的構(gòu)建是實(shí)施基因工程的第二步，也是基因工程的核心，基因工程載體的條件是能在受體細(xì)胞中保存并大量復(fù)制、有一至多了限制性內(nèi)切酶切點(diǎn)和有特殊的遺傳標(biāo)記基因，便于進(jìn)行篩選．逆轉(zhuǎn)錄酶序列中有限制酶F的切割位點(diǎn)，目的基因與運(yùn)載體結(jié)合，在粘性末端堿基互補(bǔ)配對，需要DNA連接酶作用于磷酸二酯鍵，形成重組DNA分子；該質(zhì)粒上有具有的遺傳標(biāo)記基因是抗生素A抗性基因，可以用加有抗生素A的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選；目的基因進(jìn)人細(xì)胞后插入在一條染色體DNA上，動(dòng)物細(xì)胞可以讓轉(zhuǎn)基因雌雄小鼠間相互交配，逐代篩選．

解答： 解：（1）逆轉(zhuǎn)錄是以RNA為模板合成DNA的過程，所需要的模板為RNA，原料為四種脫氧核苷酸．
（2）基因工程需要工具酶是限制酶和DNA連接酶；用到的限制酶不能破壞標(biāo)記基因（抗生素A抗性基因），且應(yīng)該整合到“逆轉(zhuǎn)錄病毒序列”上；抗生素A抗性基因?yàn)闃?biāo)記基因，用來幫助篩選目的基因．
（3）用顯微注射技術(shù)將重組質(zhì)粒溶液導(dǎo)人受精卵；如A為重組逆轉(zhuǎn)錄病毒，還可采取感染方法．
（4）小鼠出生后可從其尾巴提取DNA分子，通過DNA分子雜交方法，可檢測出攜帶目的基因的小鼠．
（5）目的基因進(jìn)人細(xì)胞后插入在一條染色體DNA上，對應(yīng)的同源染色體上無對應(yīng)的等位基因；讓轉(zhuǎn)基因小鼠相互交配，就能獲得轉(zhuǎn)基因純合子小鼠．
故答案為：I（1）RNA     （四種）脫氧核苷酸
（2）F（逆轉(zhuǎn)錄病毒序列）     限制酶和DNA連接酶（缺一不得分）  抗生素
II（3）顯微注射（法）      感染（侵染）
（4）DNA    DNA分子雜交（或核酸分子雜交）
（5）轉(zhuǎn)基因小鼠間相互交配（或雜交）

點(diǎn)評：本題考查RNA復(fù)制，逆轉(zhuǎn)錄需要的模板、原料，重組質(zhì)粒時(shí)目的基因的插入位點(diǎn)，DNA分子雜交技術(shù)的知識，意在考查學(xué)生識圖能力、信息的提取與應(yīng)用能力、通過比較與綜合做出合理判斷的能力等．