Question

【題目】回答下列有關(guān)微生物與基因工程有關(guān)的問(wèn)題
（1）基因工程的第一步是獲取目的基因，獲取的方法包括和化學(xué)方法人工合成．如果要想獲取人的胰島素基因，只能用化學(xué)方法人工合成，具體的做法是從人體細(xì)胞中獲取胰島素mRNA，再通過(guò)過(guò)程即可獲得目的基因．
（2）基因工程的第二步是將目的基因和運(yùn)載體重組，重組時(shí)需要選擇合適的限制酶和酶．常用的運(yùn)載體是細(xì)菌質(zhì)粒（如圖1所示），質(zhì)粒中ori為質(zhì)粒復(fù)制所必需的DNA序列，啟動(dòng)子是使轉(zhuǎn)錄開(kāi)始的一段DNA序列，終止子是提供轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)的DNA序列．青霉素抗性基因作為基因，以便于篩選．質(zhì)粒上還有多種限制酶的切點(diǎn)，若目的基因上也有上述質(zhì)粒中相應(yīng)限制酶的切點(diǎn)，為避免目的基因自身的環(huán)化并能與圖中質(zhì)粒準(zhǔn)確重組，可選用的限制酶是 A．NdeI和XbaI 　 B．NdeI和BamHI C．XbaI 　 D．PstI E．BamHI

（3）基因工程的第三步是將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞，例如，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物常用的受體細(xì)胞為 ．
（4）基因工程的第四步是篩選出導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞． ①如用大腸桿菌作為受體細(xì)胞，則該大腸桿菌中不應(yīng)含有青霉素抗性基因，請(qǐng)闡述其原因？ ．
②培養(yǎng)導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌時(shí)，需配帛培養(yǎng)基．該培養(yǎng)基除含有大腸桿菌必需的葡萄糖、氮源、無(wú)機(jī)鹽、水、生長(zhǎng)因子等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外，還應(yīng)加入的物質(zhì)有（多選）
A．細(xì)胞分裂素　 B．瓊脂　 C．噬菌體　 D．青霉素
③培養(yǎng)基配制和滅菌時(shí)，滅菌與調(diào)節(jié)pH的先后順序是；
一般對(duì)配置的培養(yǎng)液采用法滅菌．
④微生物接種培養(yǎng)時(shí)，可采用兩種方法．如圖2為接種后微生物培養(yǎng)的效果圖．那么獲得圖A效果的接種方法是 ， 獲得圖B效果的接種方法是 ．
（5）與大腸桿菌相比，嗜熱菌具有的特點(diǎn)是 ． （多選）
A.對(duì)青霉素不敏感
B.對(duì)真核生物的親緣關(guān)系更遠(yuǎn)
C.細(xì)胞的DNA中，堿基G和C含量較高，較穩(wěn)定
D.沒(méi)有菌毛和質(zhì)粒．

Answer 1

【答案】
（1）從某種生物體細(xì)胞中分離；胰島B；逆轉(zhuǎn)錄
（2）DNA連接；標(biāo)記；B
（3）受精卵
（4）若含有則會(huì)干擾篩選；B．D；先調(diào)節(jié)pH后滅菌；高壓滅菌；涂布法；劃線法
（5）AC
【解析】解：（1）如果要獲取目的基因，可以采取的方法通常包括從細(xì)胞中分離和通過(guò)化學(xué)方法人工合成．如果要想獲取人的胰島素基因，只能用化學(xué)方法人工合成，具體的做法是從人體胰島B細(xì)胞中獲取胰島素mRNA，再通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程即可獲得目的基因．（2）將目的基因和運(yùn)載體重組時(shí)需要用同一種的限制酶切割目的基因和運(yùn)載體，再用DNA連接酶連接．青霉素抗性基因作為標(biāo)記基因．根據(jù)啟動(dòng)子和終止子的生理作用可知，目的基因應(yīng)導(dǎo)入啟動(dòng)子和終止子之間．圖中看出，兩者之間存在于三種限制酶切點(diǎn)，但是由于Xbal在質(zhì)粒不止一個(gè)酶切位點(diǎn)，因此為使PCR擴(kuò)增的目的基因重組進(jìn)該質(zhì)粒，擴(kuò)增的目的基因兩端需分別引入NdeⅠ和BamHⅠ不同限制酶的識(shí)別序列．（3）轉(zhuǎn)基因動(dòng)物常用的受體細(xì)胞最好用受精卵．（4）①如用大腸桿菌作為受體細(xì)胞，若大腸桿菌含有青霉素抗性基因則會(huì)干擾篩選，因此該大腸桿菌中不應(yīng)含有青霉素抗性基因．②培養(yǎng)導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌時(shí)，需配制培養(yǎng)基．該培養(yǎng)基除含有大腸桿菌必需的葡萄糖、氮源、無(wú)機(jī)鹽、水、生長(zhǎng)因子等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外，還應(yīng)加入的物質(zhì)有瓊脂和青霉素．③培養(yǎng)基配制和滅菌時(shí)，先調(diào)節(jié)pH后滅菌．一般對(duì)配置的培養(yǎng)液采用高壓蒸汽滅菌法滅菌．④獲得圖A效果是均勻分布的，接種方法是涂布法；獲得圖B效果是線性分布，接種方法是劃線法．（5）A、大腸桿菌和嗜熱菌均屬于細(xì)菌，對(duì)青霉素和四環(huán)素均敏感，A正確； B、大腸桿菌和嗜熱菌與真核生物的親緣關(guān)系都很遠(yuǎn)，B錯(cuò)誤；
C、由于嗜熱菌適宜生存在高溫條件下，因此DNA結(jié)構(gòu)比較穩(wěn)定，而C和G之間以3個(gè)氫鍵連接，A和T之間以2個(gè)氫鍵連接，因此嗜熱菌細(xì)胞的DNA中堿基G和C含量較高，較穩(wěn)定，C正確；
D．大腸桿菌和嗜熱菌都有菌毛和質(zhì)粒，D錯(cuò)誤．
故選：AC．
所以答案是：（1）從某種生物體細(xì)胞中分離 胰島B 逆轉(zhuǎn)錄（2）DNA連接 標(biāo)記 B（3）受精卵（4）①若含有則會(huì)干擾篩選 ②BD③先調(diào)節(jié)pH后滅菌 高壓滅菌④涂布法 劃線法（5）A C
【考點(diǎn)精析】掌握基因工程的原理及技術(shù)是解答本題的根本，需要知道基因工程的原理是利用DNA重組技術(shù)．