Question

我國基因工程藥物的研制和生產(chǎn)發(fā)展迅猛，下圖是利用基因工程方法生產(chǎn)人生長激素的示意圖。

根據(jù)上圖回答下列問題（限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ切割形成的末端均不相同）：

（1）過程②必需的酶是__________________酶，過程④必需的酶是_________________酶。⑤為提高成功率，常用 溶液處理大腸桿菌細胞。

（2）為了使目的基因和質(zhì)粒B定向連接并且有利于受體細胞的篩選，酶1是 。

（3）如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ同時對質(zhì)粒A進行切割，用一種酶、兩種酶和三種酶分別切割時，則形成的DNA片段共 種，含有完整四環(huán)素抗性基因的DNA片段的概率是_______。

（4）作為受體的大腸桿菌細胞內(nèi)，應(yīng)不含__________基因，以利于篩選出含重組載體的受體菌。

（5）能否利用人的皮膚細胞來完成①過程，為什么？ 。

 

Answer 1

(1)反轉(zhuǎn)錄（逆轉(zhuǎn)錄） DNA連接酶 CaCl2（2）EcoRⅠ （3）9 1/3

(4)tctR（四環(huán)素抗性）（5）不能利用人的皮膚細胞來完成①過程，因為生長激素基因不在人皮膚細胞中表達，在垂體細胞中表達。

【解析】

試題分析：

（1）過程②是指由RNA獲得DNA的過程，為逆轉(zhuǎn)錄過程，需要逆轉(zhuǎn)錄酶；過程④為目的基因與運載體結(jié)合成重組質(zhì)粒，需要DNA連接酶；⑤為把重組DNA分子導(dǎo)入大腸桿菌中，一般要用CaCl2溶液處理大腸桿菌細胞。

（2）為了使目的基因和質(zhì)粒B定向連接，并且有利于受體細胞的篩選，限制酶I與另一端的限制酶PstⅠ不同，分析質(zhì)�？芍�，酶I只能是限制酶EcoRⅠ。

（3）用一種限制酶進行切割，由于3種酶的切割位點不同，因此能得到三種DNA片段；用兩種限制酶進行切割時，能得到六種DNA片段；用三種限制酶同時切割，得到的DNA片段共有三種，與用兩種酶切割后的片段重復(fù)，因此共得到9種片段；這9中片段中，有3種片段含有完整四環(huán)素抗性基因，所占比例為1/3。

（4）作為受體的大腸桿菌應(yīng)該不含標記基因，由于ampR基因被破壞，tctR基因為標記基因，故受體菌中不含tctR基因。

（5）不能用人的皮膚細胞獲取生長激素mRNA，因為在人的皮膚細胞中生長激素基因不表達，不能獲得生長激素的mRNA。

考點：本題考查基因工程的有關(guān)知識，意在考查考生理解所學(xué)知識的要點，把握知識間的內(nèi)在聯(lián)系的能力。