Question

科學(xué)家將魚抗凍蛋白基因轉(zhuǎn)入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相對寒冷的環(huán)境中生長。質(zhì)粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四種限制酶切割位點，下圖是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程的示意圖（ampr為抗氨芐青霉素基因），其中①—④是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程中的相關(guān)步驟，Ⅰ、Ⅱ表示相關(guān)結(jié)構(gòu)或細胞。請據(jù)圖作答：

（1）在構(gòu)建基因表達載體時，可用一種或者多種限制酶進行切割。該酶的特點 。

為了避免目的基因和載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，在此實例中，應(yīng)該選用限制酶 對含魚抗凍蛋白基因的DNA、質(zhì)粒進行切割，然后用 將它們連接起來。

（2）培養(yǎng)基中的氨芐青霉素會抑制番茄愈傷組織細胞的生長，要利用該培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入含魚的抗凍蛋白基因的番茄細胞，應(yīng)使基因表達載體Ⅰ中含有 作為標(biāo)記基因。

（3）研究人員通常采用 法將魚抗凍蛋白基因?qū)�入番茄細胞�?nèi)。通常采用 技術(shù)，在分子水平檢測目的基因是否翻譯形成了相應(yīng)的蛋白質(zhì)。

（4）利用組織培養(yǎng)技術(shù)將導(dǎo)入含魚的抗凍蛋白基因的番茄組織細胞培育成植株。圖中③、④依次表示組織培養(yǎng)過程中番茄組織細胞的 、 過程。在培養(yǎng)過程中，除了提供水分、無機鹽、糖類、維生素以及氨基酸外，還需要在培養(yǎng)基中加入 。同時，在培養(yǎng)過程中,除必需的溫度、光照和氧氣等外界條件外，成功的另一個關(guān)鍵是操作過程必須保證 。

（5）與植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基相比,用于動物細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)液除含有水分、無機鹽、糖類、維生素以及氨基酸等之外,通常還要添加 。

Answer 1