Question

【題目】回答下列(一)、(二)小題。

(一)回答泡菜腌制與微生物分離有關(guān)的問題

（1）泡菜是利用微生物發(fā)酵制成的,為減少泡菜腌制時間,可加入一些陳泡菜汁,這相當于接種已經(jīng)___________________的發(fā)酵菌,發(fā)酵產(chǎn)物含有機酸和_________________物質(zhì)等,還有亞硝酸。若以光電比色法測定泡菜中亞硝酸鹽含量,需將制備的待測樣液與_______________________發(fā)生重氮化反應(yīng),產(chǎn)物再與N-1-萘基乙二胺偶聯(lián)而顯色。

（2）現(xiàn)取5mL上述陳泡菜汁用于測定其中的乳酸菌含量,可采取___________方法進行操作:取0.5mL泡菜汁逐級稀釋至10-5,取10-4、10-5稀釋液各0.1mL,分別接種到固體培養(yǎng)基,置于特定環(huán)境培養(yǎng)48h后,菌落計數(shù)。若培養(yǎng)結(jié)果如下圖所示,則5mL陳泡菜汁中乳酸菌約________________個。

（3）除了上述方法之外,還有________________________和_______________________等方法可用于陳泡菜汁中乳酸菌的計數(shù)。

(二)下圖為單克隆抗體制備的基本過程,其中①、②為操作過程。

回答下列問題:

（1）圖中過程①需滅活的仙臺病毒介導或_______________介導或電融合技術(shù)。過程②表示_________________。

（2）圖中細胞甲的名稱為__________________。對細胞乙進行抗體檢測的目的是__________________。

（3）體外培養(yǎng)到一定時期的細胞丁會因為_________________和代謝消耗引起營養(yǎng)枯竭,需進行傳代培養(yǎng)。獲取單克隆抗體可作為_________________,研究相應(yīng)抗原蛋白的結(jié)構(gòu)、細胞學分布及其功能。

（4）上述全過程需多次細胞克隆培養(yǎng),下列不屬于提高細胞克隆形成率措施的是_____________________。

A.添加飼養(yǎng)層細胞 B.添加胎牛血清 C.添加蔗糖 D.使用CO2培養(yǎng)箱

Answer 1

【答案】擴增/擴大培養(yǎng) 醇類 對氨基苯磺酸 （稀釋）涂布分離/涂布 7107 血球/血細胞（計數(shù)板）計數(shù)法 比濁（計）法 聚乙二醇/PEG 抗體檢測（與克隆培養(yǎng)） 骨髓瘤細胞 獲取能夠產(chǎn)生相應(yīng)抗體雜交瘤細胞 細胞密度過大/數(shù)量過多 探針 C

【解析】

（一）制作泡菜時所使用的微生物是乳酸菌，代謝類型是異養(yǎng)厭氧型。泡菜中的亞硝酸鹽的含量可以用比色法進行測定，原理是在鹽酸酸化的條件下，亞硝酸鹽和對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后，與N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色的染料，將顯色反應(yīng)后的樣品與已知濃度標準顯色液目測比較，可以大致估算出泡菜中亞硝酸鹽含量。

（二）單克隆抗體的制備：1、細胞來源：B淋巴細胞：能產(chǎn)生特異性抗體，在體外不能無限繁殖；骨髓瘤細胞：不產(chǎn)生專一性抗體，體外能無限繁殖。
2、雜交瘤細胞的特點：既能大量增殖，又能產(chǎn)生特異性抗體。
3、兩次次篩選：①篩選得到雜交瘤細胞（去掉未雜交細胞以及自身融合的細胞）；②篩選出能夠產(chǎn)生特異性抗體的細胞群。
4、兩次抗體檢測：專一抗體檢驗陽性。
5、提取單克隆抗體：從培養(yǎng)液或小鼠腹水中提取。
6、單克隆抗體的優(yōu)點：特異性強、靈敏度高，并可能大量制備。

（一）（1）為減少泡菜腌制時間，可加入一些陳泡菜汁，由于陳泡菜汁中含有大量乳酸菌，所以這相當于接種已經(jīng)擴大培養(yǎng)了的發(fā)酵菌。發(fā)酵產(chǎn)物含有機酸和醇類物質(zhì)等，還有亞硝酸。測定泡菜中亞硝酸鹽含量，需將制備的待測樣液與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)，產(chǎn)物再與N-1-萘基乙二胺偶聯(lián)而顯玫瑰紅色。

（2）計算菌體數(shù)量，需要使用稀釋涂布平板法接種，所以若測定泡菜汁中的乳酸菌含量，可采�。ㄏ♂專┩坎挤蛛x方法進行操作。取0.5mL泡菜汁逐級稀釋至10-5，取10-4、10-5稀釋液各0.1mL，分別接種到固體培養(yǎng)基，置于特定環(huán)境培養(yǎng)48h后，菌落計數(shù)。經(jīng)統(tǒng)計當稀釋至10-5時，菌落平均數(shù)是14個，則5ml陳泡菜汁中乳酸菌約14÷0.1×5×105=7x107個。

（3）除了上述方法之外，還有血球/血細胞(計數(shù)板)計數(shù)法、比濁(計)法、光電比色法、用比濁計測、測渾濁度等方法可用于陳泡菜汁中乳酸菌的計數(shù)。

（二）（1）圖中過程①需滅活的仙臺病毒介導或聚乙二醇介導或電融合技術(shù)。過程②表示獲取能夠產(chǎn)生相應(yīng)抗體的雜交瘤細胞。
（2）骨髓瘤細胞可大量增殖，經(jīng)免疫的B細胞可分泌抗體，將二者融合可篩選得到既能無限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞，所以圖中細胞甲的名稱為骨髓瘤細胞。對細胞乙進行抗體檢測的目的是獲取能夠產(chǎn)生相應(yīng)抗體的雜交瘤細胞。
（3）體外培養(yǎng)到一定時期的細胞丁會因為細胞密度過大和代謝消耗多而引起營養(yǎng)枯竭，此時需轉(zhuǎn)移到其它培養(yǎng)瓶中進行傳代培養(yǎng)。獲取單克隆抗體可作為探針，研究相應(yīng)抗原蛋白的結(jié)構(gòu)、細胞學分布及其功能。
（4）細胞培養(yǎng)需要的條件是添加飼養(yǎng)層細胞，添加胎牛血清和使用CO2培養(yǎng)箱，綜上所述，ABD不符合題意，C符合題意。故選C。