Question

【題目】已知某傳染性疾病的病原體為RNA病毒，該病毒表面的A蛋白為主要抗原，制備抗A蛋白抗體的部分流程如下圖．
請(qǐng)回答：
（1）①代表的是過(guò)程．為獲得A基因表達(dá)載體，需用酶對(duì)A基因和運(yùn)載體進(jìn)行切割．將A基因表達(dá)載體導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞常用的方法是 ．
（2）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增A基因時(shí)，設(shè)計(jì)引物序列的主要依據(jù)是 ， 加入引物的作用是 ．
（3）與體內(nèi)DNA復(fù)制相比較，PCR反應(yīng)要在一定的緩沖溶液中才能進(jìn)行，并且要嚴(yán)格控制等條件．
（4）過(guò)程③采用的技術(shù)是 ， 獲得的X叫細(xì)胞．

Answer 1

【答案】
（1）逆轉(zhuǎn)錄；限制；顯微注射法
（2）A基因兩端的部分核苷酸序列；與A基因單鏈相應(yīng)互補(bǔ)序列結(jié)合，然后再DNA聚合酶作用下進(jìn)行延伸
（3）溫度
（4）動(dòng)物細(xì)胞融合；雜交瘤
【解析】解：（1）由以上分可知①是逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程．構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，首先需要用同種限制酶切割含有目的基因的外源DNA和運(yùn)載體，其次需要用DNA連接酶將目的基因與運(yùn)載體連接形成重組DNA．將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法．（2）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增A基因時(shí)，根據(jù)A基因兩端的部分核苷酸序列設(shè)計(jì)引物序列，加入引物的作用是與A基因單鏈相應(yīng)互補(bǔ)序列結(jié)合，然后再DNA聚合酶作用下進(jìn)行延伸．（3）PCR擴(kuò)增目的基因的過(guò)程：①高溫變性：DNA解旋過(guò)程（PCR擴(kuò)增中雙鏈DNA解開(kāi)不需要解旋酶，高溫條件下氫鍵可自動(dòng)解開(kāi)）；低溫復(fù)性：引物結(jié)合到互補(bǔ)鏈DNA上；③中溫延伸：合成子鏈．因此，與體內(nèi)DNA復(fù)制相比較，PCR反應(yīng)要在一定的緩沖溶液中才能進(jìn)行，并且要嚴(yán)格控制溫度等條件．（4）③過(guò)程需要采用動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)，根據(jù)圖中信息可知X為雜交瘤細(xì)胞． 所以答案是：（1）逆轉(zhuǎn)錄 限制 顯微注射法（2）A基因兩端的部分核苷酸序列 與A基因單鏈相應(yīng)互補(bǔ)序列結(jié)合，然后再DNA聚合酶作用下進(jìn)行延伸（3）溫度（4）動(dòng)物細(xì)胞融合 雜交瘤
【考點(diǎn)精析】通過(guò)靈活運(yùn)用基因工程的原理及技術(shù)和單克隆抗體的制備，掌握基因工程的原理是利用DNA重組技術(shù)；對(duì)免疫小鼠注射特定的抗原蛋白；提取B淋巴細(xì)胞；同時(shí)用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的方法培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞并提取；促使它們細(xì)胞融合；在特定的選擇培養(yǎng)基上篩選出融合的雜種細(xì)胞；然后對(duì)它進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)；最后將雜交瘤細(xì)胞在體外做大規(guī)模培養(yǎng)或注射入小鼠腹腔內(nèi)增殖，從細(xì)胞培養(yǎng)液或小鼠腹水中可得到大量的單克隆抗體即可以解答此題．