Question

【題目】圖1是目的基因，圖2為應(yīng)用于基因工程中改造后的質(zhì)粒PZyj，其長(zhǎng)度為4 692 bp（bp即堿基對(duì)），其中wzh基因能合成某種化合物，其表達(dá)產(chǎn)物能使細(xì)菌白色菌落和培養(yǎng)基中化合物A反應(yīng)呈紅色，tsr為硫鏈絲菌素（一種抗生素）抗性基因；而MspI、EcoR I、BamH I為限制酶，括號(hào)中數(shù)字表示該酶位于質(zhì)粒的位置，其中BamH I識(shí)別的堿基序列和酶切位點(diǎn)（箭頭表示）為。啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA。請(qǐng)回答下列問題：

（1）用EcoR I酶對(duì)質(zhì)粒切割后DNA的片段長(zhǎng)度為______bp，EcoR I酶的作用特___________________。

（2）用MspI酶處理質(zhì)粒PZyj后，酶切位點(diǎn)之間最短的DNA片段的長(zhǎng)度為 ___________bp，將上述含Msp I酶DNA片段的溶液用高溫處理后，再加DNA連接酶作用半小時(shí)，若僅考慮兩兩相連，則有___________種連接產(chǎn)物。

（3）將質(zhì)粒PZyj和目的基因用限制酶處理后進(jìn)行連接，形成重組質(zhì)粒。該過程應(yīng)選用___________酶，保證質(zhì)粒與目的基因具有相同的黏性末端；該質(zhì)粒中tsr基因和wzh基因的作用是_________。

（4）為了篩選出成功導(dǎo)入含目的基因的重組質(zhì)粒的細(xì)菌，應(yīng)將細(xì)菌接種于含___________（填物質(zhì)名稱）培養(yǎng)基上培養(yǎng)。

Answer 1

【答案】

（1）4 692（2分） 識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并使特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂（3分）

（2）586（2分） 6（2分）

（3）BamH I（2分） 作為標(biāo)記基因，便于篩選含目的基因的受體細(xì)胞（2分）

（4）化合物A和硫鏈絲菌素（2分）

【解析】

（1）PZyj質(zhì)粒上EcoR I酶的酶切位點(diǎn)只有一個(gè)，經(jīng)過切割，質(zhì)粒由環(huán)狀變?yōu)殒湢�，質(zhì)粒上堿基數(shù)量不變。（2）PZyj質(zhì)粒上Msp I酶的酶切位點(diǎn)有三個(gè)，從圖上標(biāo)注的堿基數(shù)目的位置可以看出，在1 270到1 857之間的片段最短，堿基對(duì)是從1 270開始到1 857終止，共有586個(gè)堿基對(duì)；由于切割形成三個(gè)不等長(zhǎng)片段的黏性末端都是一樣的，所以用DNA連接酶使其相互連接的種類有：同種DNA片段相連和異種DNA片段連接，共有6種。

（3）構(gòu)建重組質(zhì)粒首先要考慮目的基因和質(zhì)粒是否有共同的限制酶切割位點(diǎn)，從圖中可看出BamH I是目的基因和PZyj質(zhì)粒共有的酶；題干中已經(jīng)說明tsr基因和wzh基因是作為標(biāo)記基因，其目的是便于篩選含目的基因的受體細(xì)胞。

（4）使用含有化合物A和硫鏈絲菌素的選擇培養(yǎng)基，含tsr基因和wzh基因的菌在培養(yǎng)基上呈紅色，否則是白色。