Question

11．下面是對大腸桿菌進行數(shù)量測定的實驗，請回答有關問題．步驟如下：
A．制備稀釋倍數(shù)為10²、10³、10⁴、10⁵、10⁶的系列稀釋液．
B．如圖是采用純化酵母菌培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖．
（1）對大腸桿菌進行數(shù)量測定選用圖[A]稀釋涂布平板法接種樣品．
結果分析：
C．適宜溫度下培養(yǎng)．
（2）測定的大腸桿菌數(shù)，在對應稀釋倍數(shù)為10⁶的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計結果，正確可信的是D
A．一個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)是53
B．兩個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)是12和78，取平均值45
C．三個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是5、85和60，取平均值50
D．四個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是44、31、64和55，取平均值48.5
（3）一同學在稀釋倍數(shù)為10⁵的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數(shù)的平均值為43.4，那么每毫升樣品中的菌落數(shù)是（涂布平板時所用稀釋液的體積為0.1mL）4.34×10⁷個．
（4）用這種方法測定密度，實際活菌數(shù)量要比測得的數(shù)量少，因為當兩個或多個細胞連在一起時平板上觀察的是一個菌落．
（5）某同學在測定大腸桿菌的密度時發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)基上還有其他雜菌的菌落，能否肯定該大腸桿菌的品系被污染了？不能，為什么？因為不能排除雜菌來自培養(yǎng)基或來自培養(yǎng)過程．
（6）自己在家中制作的果醋很容易受大腸桿菌等微生物的污染，而包裝瓶上寫著105℃高溫瞬時的果醋瓶上寫著“不含任何防腐劑，最長保質期為一年”，其中的奧秘是高溫殺死了微生物．

Answer 1

分析 1、平板劃線法是接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的造作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面，在數(shù)次劃線之后培養(yǎng)，可以分離到由一個細胞繁殖而來的子細胞群體-菌落；稀釋涂布平板法是將菌液進行一系列梯度稀釋，然后將不同梯度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基上，進行培養(yǎng)獲得由單細胞繁殖而來的菌落．
2、對微生物進行分離、計數(shù)常用的接種方法是稀釋涂布平板法，估算每毫升樣品中的細菌數(shù)時，往往選取30～300的平板，取至少三個平板的平均值，每毫升樣品中的細菌數(shù)=（平板的平均菌落數(shù)÷涂布的體積）×稀釋的倍數(shù)；由于當兩個或多個細胞連在一起時平板上觀察的是一個菌落，因此估算的菌落數(shù)少于實際菌落數(shù)．
3、微生物培養(yǎng)過程中要嚴格遵循無菌操作．

解答 解：（1）對大腸桿菌進行數(shù)量測定的實驗常用的接種方法是稀釋涂布平板法，即圖中的A．
（2）分析選項可知，D選項中四個平板的每個平板的菌落數(shù)在30～300之間，且非常接近，因此D選項的結果最可靠．
（3）每毫升樣品中的細菌數(shù)是═（平板的平均菌落數(shù)÷涂布的體積）×稀釋的倍數(shù)=（43.4÷0.1）×10⁵=34.34×10⁷個．
（4）由于當兩個或多個細胞連在一起時平板上觀察的是一個菌落，因此估算的菌落數(shù)少于實際菌落數(shù)．
（5）某同學在測定大腸桿菌的密度時發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)基上還有其他雜菌的菌落，不能確定大腸桿菌品系被污染，也可能是培養(yǎng)基被污染或接種過程沒有嚴格按照無菌技術進行操作或培養(yǎng)過程污染．
（6）105℃高溫將微生物殺死，因此可以較長時間保存．
故答案為：
（1）A  稀釋涂布平板法
（2）D
（3）4.34×10⁷
（4）少   當兩個或多個細胞連在一起時平板上觀察的是一個菌落
（5）不能   因為不能排除雜菌來自培養(yǎng)基或來自培養(yǎng)過程
（6）高溫殺死了微生物

點評 本題旨在考查學生對微生物實驗室培養(yǎng)技術的熟練掌握并應用相關知識解決實際問題的能力．