Question

16．選擇培養(yǎng)基是根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基．在基因工程和細(xì)胞工程的相關(guān)技術(shù)中均有用到選擇培養(yǎng)基，結(jié)合所學(xué)知識回答下列問題：
（1）如圖為含由目的基因的DNA分子和運(yùn)載體（質(zhì)粒），二者均含有一些限制酶的酶切位點(diǎn)，質(zhì)粒上還含有兩種抗性基因，欲將圖示中目的基因和運(yùn)載體構(gòu)建為基因表達(dá)載體，需要用限制酶HindⅢ、SalⅠ對他們進(jìn)行切割，同時(shí)用DNA連接酶將它們的末端連接起來．構(gòu)建的表達(dá)載體除具有目的基因和抗性基因外還應(yīng)具有啟動子、終止子、復(fù)制原點(diǎn)等結(jié)構(gòu)．如在培養(yǎng)基中加入氨芐青霉素，轉(zhuǎn)入重組質(zhì)粒和單純質(zhì)粒的受體細(xì)胞能夠生長，如將上述生長的細(xì)菌轉(zhuǎn)入加油四環(huán)素的培養(yǎng)基中，則含有重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞不能正常生長．
（2）單克隆抗體制備過程中，也需要用到選擇培養(yǎng)基．將一種B淋巴細(xì)胞與骨髓癌細(xì)胞融合，然后用選擇培養(yǎng)基篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞，該細(xì)胞具有無限增殖、能夠產(chǎn)生特異性抗體的特點(diǎn)．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測、個(gè)體水平上的鑒定．

解答 解：（1）根據(jù)題圖信息，圖示中目的基因和運(yùn)載體構(gòu)建為基因表達(dá)載體，需要用限制酶和DNA連接酶．圖中BamHⅠ限制酶的切割位點(diǎn)存在于目的基因的中間位置，若使用該限制酶切割目的基因會導(dǎo)致目的基因失活，因此應(yīng)選擇HindⅢ、SalⅠ兩種酶切割目的基因和質(zhì)粒．構(gòu)建的表達(dá)載體除具有目的基因和抗性基因外還應(yīng)具有啟動子、終止子、復(fù)制原點(diǎn)等結(jié)構(gòu)．圖中質(zhì)粒如使用HindⅢ、SalⅠ兩種限制酶切割會使質(zhì)粒中的抗四環(huán)素基因失活，而抗氨芐青霉素基因沒有破壞．因此如在培養(yǎng)基中加入 氨芐青霉素，轉(zhuǎn)入重組質(zhì)粒和單純質(zhì)粒的受體細(xì)胞能夠生長，如將上述生長的細(xì)菌轉(zhuǎn)入加有四環(huán)素的培養(yǎng)基中，則含有重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞不能正常生長．
（2）單克隆抗體制備過程中，已免疫的B淋巴細(xì)胞與骨髓癌細(xì)胞融合后，需要用選擇培養(yǎng)基篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞，該細(xì)胞結(jié)合了B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞的特點(diǎn)，即具有無限增殖、能夠產(chǎn)生特異性抗體的特點(diǎn)．
故答案為：
（1）HindⅢ、SalⅠDNA連接      終止子     復(fù)制原點(diǎn)     氨芐青霉素     四環(huán)素
（2）能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤     無限增殖、能夠產(chǎn)生特異性抗體

點(diǎn)評 本題考查基因工程和單克隆抗體制備的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理、操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，識記單克隆抗體制備的過程以及雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題，屬于考綱識記層次的考查．