Question

【題目】通過咽拭子取樣進行RT-PCR技術檢測是目前臨床上診斷新型冠狀病毒感染疑似患者的常用方法，用于核酸檢測的RT-PCR試劑盒的部分工作原理簡圖如下�；卮鹣铝袉栴}：

（1）RT-PCR是指以病毒的RNA為模板通過_________過程合成cDNA，并對cDNA進行PCR擴增的過程。進行RT-PCR過程中，需要加入的酶有__________。

（2）利用RT-PCR試劑盒對新型冠狀病毒進行檢測時，除借助上述RT-PCR技術外，還需要有特異性探針。制作該探針的依據(jù)是__________，利用該探針對新型冠狀病毒進行檢測的原理是___________。

（3）除核酸檢測外，研究人員還研發(fā)了基于病毒蛋白的檢測技術，該項技術的關鍵是生產(chǎn)出能與新冠病毒結合的特異性抗體。生產(chǎn)該種抗體的大致方案如下：

①向小鼠體內(nèi)注射新冠病毒的抗原蛋白；

②分離免疫小鼠的B淋巴細胞，并與小鼠的骨髓瘤細胞融合，多次篩選、檢測，最終獲得所需雜交瘤細胞；

③將獲得的雜交瘤細胞在體外條件下做大規(guī)模培養(yǎng)，獲得大量的特異性抗體。

上述生產(chǎn)抗體的方案中使用的技術手段有__________，其中步驟②中獲得的雜交瘤細胞具有__________等特點；步驟③中為防止細胞代謝產(chǎn)物積累對細胞自身造成危害，應采取的措施是__________。

Answer 1

【答案】逆轉(zhuǎn)錄 逆轉(zhuǎn)錄酶和耐高溫的DNA聚合酶 新型冠狀病毒的（核糖）核苷酸序列 分子雜交 動物細胞培養(yǎng)、動物細胞融合 既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專一的抗體 定期更換培養(yǎng)液

【解析】

一、PCR技術：
1、概念：PCR全稱為聚合酶鏈式反應，是一項在生物體外復制特定DNA的核酸合成技術。
2、原理：DNA復制。
3、前提條件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一對引物。
4、條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）
5、過程：①高溫變性：DNA解旋過程（PCR擴增中雙鏈DNA解開不需要解旋酶，高溫條件下氫鍵可自動解開）；低溫復性：引物結合到互補鏈DNA上；③中溫延伸：合成子鏈。
二、單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細胞；誘導B細胞和骨髓瘤細胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞；進行抗體檢測，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞；進行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。

（1）以RNA為模板合成cDNA的過程為逆轉(zhuǎn)錄過程，該過程需要逆轉(zhuǎn)錄酶的參與，利用PCR技術對cDNA進行擴增時需要耐高溫DNA聚合酶的參與。
（2）探針是指被放射性同位素標記或熒光標記的一段單鏈核酸，因此制作該探針的依據(jù)是新型冠狀病毒的核苷酸序列；利用該探針對新型冠狀病毒進行檢測的原理是分子雜交。
（3）上述方案制備的是單克隆抗體，采用的技術手段有動物細胞培養(yǎng)、動物細胞融合；雜交瘤細胞的特點是既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專一的抗體；步驟③中為防止細胞代謝產(chǎn)物積累對細胞自身造成危害，應定期更換培養(yǎng)液。