Question

下圖是培育表達人乳鐵蛋白的乳腺生物反應(yīng)器的技術(shù)路線。圖中tet^R表示四環(huán)素抗性基因，amp^R表示氨芐青霉素抗性基因，BamH Ⅰ、Hind Ⅲ、SmaⅠ直線所示為三種限制酶的酶切位點。

據(jù)圖回答：

(1)圖中將人乳鐵蛋白基因插入載體，需用__________________限制酶同時酶切載體和人乳鐵蛋白基因。篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含______的培養(yǎng)基上進行。

(2)能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細胞中特異性表達的調(diào)控序列是______(填字母代號)。

A．啟動子　　B．tet^R　　C．復(fù)制原點　　D．amp^R

(3)過程①可采用的操作方法是______(填字母代號)。

A．農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化　　　　　B．大腸桿菌轉(zhuǎn)化

C．顯微注射 D．細胞融合

(4)過程②采用的生物技術(shù)是________________。

(5)對早期胚胎進行切割，經(jīng)過程②可獲得多個新個體。這利用了細胞的______性。

(6)為檢測人乳鐵蛋白是否成功表達，可采用______(填字母代號)技術(shù)。

A．核酸分子雜交 B．基因序列分析

C．抗原—抗體雜交 D．PCR

 

Answer 1

(1)Hind Ⅲ和BamHⅠ　氨芐青霉素　(2)A　(3)C　(4)胚胎移植技術(shù)　(5)全能　(6)C

 

(1)由圖示可知：需用Hind Ⅲ和BamHⅠ限制酶同時酶切載體和人乳鐵蛋白基因，因酶切后tet^R四環(huán)素抗性基因結(jié)構(gòu)被破壞而amp^R結(jié)構(gòu)完好，故用含氨芐青霉素的選擇培養(yǎng)基可篩選含有重組載體的大腸桿菌。(2)啟動子是一段特殊的DNA序列，是RNA聚合酶識別和結(jié)合的位點，可調(diào)控基因的特異性表達。(3)過程①表示把重組載體導(dǎo)入受體細胞的過程，當受體細胞為動物細胞時，常采用顯微注射法。(4)過程②表示把早期胚胎移植到代孕母牛子宮的過程，屬于胚胎移植技術(shù)。(5)經(jīng)過程②得到新個體是細胞全能性的體現(xiàn)。(6)人乳鐵蛋白基因是否成功表達，關(guān)鍵看是否有其表達產(chǎn)物即人乳鐵蛋白，可用抗原—抗體雜交法檢測該蛋白是否存在。