Question

【題目】雷帕霉素是一種新型酯類免疫抑制劑，研究者通過(guò)實(shí)驗(yàn)探究雷帕霉素對(duì)小鼠成肌細(xì)胞能量代謝的影響。

（1）____是驅(qū)動(dòng)細(xì)胞生命活動(dòng)的直接能源物質(zhì)，動(dòng)物細(xì)胞中該物質(zhì)中的能量來(lái)自_____這一代謝過(guò)程，發(fā)生場(chǎng)所為_____。

（2）PGC-1、YY1 和 mTOR 是細(xì)胞中調(diào)節(jié)線粒體基因轉(zhuǎn)錄的轉(zhuǎn)錄因子。研究人員用一定濃度的雷帕霉素處理小鼠成肌細(xì)胞,檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子 PGC-1 的RNA 相對(duì)含量和蛋白質(zhì)含量。圖1 結(jié)果顯示：_______________ 。

（3）免疫共沉淀技術(shù)是在體外進(jìn)行的研究蛋白質(zhì)相互作用的一種技術(shù)。其原理是抗體 A 可與蛋白A 特異性結(jié)合，因此使用抗體 A 可將蛋白 A“沉淀”。如果蛋白 B 與蛋白 A 相互結(jié)合，那么抗體 A 在將蛋白 A“沉淀”的同時(shí)，也會(huì)把蛋白B“沉淀”下來(lái)。此技術(shù)常用于尋找和篩選與已知蛋白質(zhì)發(fā)生相互作用的蛋白質(zhì)。

①研究人員欲研究這三種轉(zhuǎn)錄因子（蛋白質(zhì)）之間的相互作用。利用免疫共沉淀技術(shù)，檢測(cè)不同處理?xiàng)l件下，PGC-1、YY1、mTOR 被 YY1 抗體“沉淀”的情況，結(jié)果如圖 2。實(shí)驗(yàn)中研究人員檢測(cè)各蛋白提取結(jié)果的目的是_______________。根據(jù)圖 2 結(jié)果，請(qǐng)?jiān)趫D 3 中構(gòu)建線粒體中雷帕霉素與被“沉淀”蛋白間的互作模式圖。

②若想驗(yàn)證該互作模式，可繼續(xù)選擇_____（a：mTOR；b：PGC-1；c：無(wú)關(guān)）抗體進(jìn)行免疫共沉淀。 若互作模式成立，請(qǐng)?jiān)趫D 4 中相應(yīng)位置用“—”畫(huà)出可“沉淀”出的條帶_____。

（4）綜合上述實(shí)驗(yàn)，說(shuō)明雷帕霉素對(duì)細(xì)胞能量代謝影響的分子機(jī)制是_____。

Answer 1

【答案】ATP 細(xì)胞呼吸 細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)和線粒體 雷帕霉素降低了成肌細(xì)胞內(nèi)PGC-1基因的表達(dá)量 保證雷帕霉素不會(huì)降解三種蛋白 b 雷帕霉素可抑制小鼠成肌細(xì)胞中PGC-1基因的表達(dá)；同時(shí)抑制小鼠成肌細(xì)胞線粒體中PGC-1 蛋白與YY1-mTOR復(fù)合體的結(jié)合，從而進(jìn)一步抑制線粒體基因的表達(dá)

【解析】

1、ATP的中文名稱叫三磷酸腺苷，其結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)式為A-P～P～P，其中A代表腺苷，P代表磷酸基團(tuán)，-代表普通磷酸鍵，～代表高能磷酸鍵。水解時(shí)遠(yuǎn)離A的磷酸鍵易斷裂，釋放大量的能量，供給各項(xiàng)生命活動(dòng)，所以ATP是新陳代謝所需能量的直接來(lái)源。

2、有氧呼吸：

第一階段 C6H12O6(葡萄糖) 4[H]（還原氫）+2C3H4O3（丙酮酸）+少量能量；場(chǎng)所細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中。

第二階段 2C3H4O3（丙酮酸）+6H2O（水）20[H]（還原氫）+6CO2(二氧化碳)+ 少量能量；場(chǎng)所：線粒體基質(zhì)中。

第三階段 24[H]（還原氫）+6O2（氧氣）12H2O(水)+大量能量；場(chǎng)所：線粒體內(nèi)膜。

總反應(yīng)式 C6H12O6+6H2O+6O26CO2+12H2O+大量能量。

無(wú)氧呼吸：

C6H12O6 2 C3H6O3（乳酸）。

（1）ATP是驅(qū)動(dòng)細(xì)胞生命活動(dòng)的直接能源物質(zhì)，動(dòng)物細(xì)胞中合成ATP的能量來(lái)自細(xì)胞呼吸；細(xì)胞呼吸包括無(wú)氧呼吸和有氧呼吸，無(wú)氧呼吸整個(gè)過(guò)程都在細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)，而有氧呼吸的場(chǎng)所在細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)和線粒體，故細(xì)胞呼吸的場(chǎng)所在細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)和線粒體。

（2）通過(guò)圖1可以看出，未加雷帕霉素的組，mRNA和PGC-1的量都有高于雷帕霉素的組，而PGC-1是細(xì)胞中調(diào)節(jié)線粒體基因轉(zhuǎn)錄的轉(zhuǎn)錄因子，所以圖1 結(jié)果顯示：雷帕霉素降低了成肌細(xì)胞內(nèi)PGC-1基因的表達(dá)量。

（3）①實(shí)驗(yàn)中研究人員檢測(cè)各蛋白提取結(jié)果的目的是保證雷帕霉素不會(huì)降解PGC-1、YY1、mTOR這三種蛋白。

②通過(guò)圖2YY1抗體免疫共沉淀結(jié)果看出，PGC-1加入雷帕霉素與YY1抗體免疫無(wú)沉淀形成，故想驗(yàn)證該互作模式，可繼續(xù)選擇b：PGC-1抗體進(jìn)行免疫共沉淀。若互作模式成立，圖 4 中可“沉淀”出的條帶如圖：。

（4）綜合上述實(shí)驗(yàn)，說(shuō)明雷帕霉素對(duì)細(xì)胞能量代謝影響的分子機(jī)制是：雷帕霉素可抑制小鼠成肌細(xì)胞中PGC-1基因的表達(dá)；同時(shí)抑制小鼠成肌細(xì)胞線粒體中PGC-1 蛋白與YY1-mTOR復(fù)合體的結(jié)合，從而進(jìn)一步抑制線粒體基因的表達(dá)。