Question

【題目】（1）用限制酶BamHI和BclI（識(shí)別序列和切割位點(diǎn)如圖A所示）聯(lián)合切開(kāi)長(zhǎng)度為2.8kb（1 kb = 1000對(duì)堿基）的pul基因，并將之與BamHI打開(kāi)的質(zhì)粒（如圖B所示）粘連拼接，那么所獲得的重組質(zhì)粒（每個(gè)質(zhì)粒分子含單個(gè)pul基因）用BamHI和EcoRI聯(lián)合酶切，可產(chǎn)生長(zhǎng)度分別為__________kb的片段或者長(zhǎng)度分別為________________kb的片段。

（2）上述重組質(zhì)粒與大腸桿菌受體細(xì)胞混合進(jìn)行導(dǎo)入操作，之后還需要篩選，這是因?yàn)?/span>_________________________________________________。

（3）上述含重組質(zhì)粒的大腸桿菌細(xì)胞進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)可獲得普魯蘭酶產(chǎn)品，在工業(yè)化應(yīng)用之前可先進(jìn)行提純及固定化處理，這個(gè)過(guò)程在生物工程中稱(chēng)為___________，其目的和原理是___________（填下列選項(xiàng)）。

A．使普魯蘭酶不溶于水，因?yàn)橹ф湹矸鄄蝗苡谒?/span>

B．使普魯蘭酶重復(fù)使用，因?yàn)槊冈诜磻?yīng)前后性質(zhì)不變

C．使普魯蘭酶更趨穩(wěn)定，因?yàn)榈鞍踪|(zhì)固定化后不易被降解

D．使普魯蘭酶活性更高，因?yàn)榈鞍捉Y(jié)構(gòu)在固定化后往往會(huì)改變

Answer 1

【答案】1.4、6.8 kb 4.0、4.2 kb 重組質(zhì)粒導(dǎo)入概率很低 酶工程 B

【解析】

限制酶BamHI和BclI切開(kāi)pul基因，BamHI打開(kāi)的質(zhì)粒，連接的時(shí)候存在兩種情況，正接和反接。且由圖A可知，BclI切開(kāi)的黏性末端與BamHI打開(kāi)的黏性末端的連接產(chǎn)物不能在被限制酶BamHI識(shí)別。故重組質(zhì)粒有兩種，5.4（含BamHI和EcoRI酶切位點(diǎn)）+2.8或者是4.0+（1.4+2.8）（BamHI和EcoRI酶切位點(diǎn)）。

（1）根據(jù)以上分析可知，用BamHI和EcoRI聯(lián)合酶切，可產(chǎn)生長(zhǎng)度分別為1.4kb、5.4-1.4+2.8=6.8kb的片段或者長(zhǎng)度分別為5.4-1.4=4.0kb、2.8+1.4=4.2kb的的片段。

（2）上述重組質(zhì)粒與大腸桿菌受體細(xì)胞混合進(jìn)行導(dǎo)入操作，之后還需要篩選，這是因?yàn)橹亟M質(zhì)粒導(dǎo)入成功的概率很低。

（3）上述含重組質(zhì)粒的大腸桿菌細(xì)胞進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)可獲得普魯蘭酶產(chǎn)品，在工業(yè)化應(yīng)用之前可先進(jìn)行提純及固定化處理，這個(gè)過(guò)程在生物工程中稱(chēng)為酶工程，其目的和原理是使普魯蘭酶重復(fù)使用，因?yàn)槊冈诜磻?yīng)前后性質(zhì)不變，故選B。