Question

【題目】蘿卜的蛋白A具有廣泛的抗植物病菌作用，而且對人體沒有影響。我國科學家欲獲得高效表達蛋白A的轉基因大腸桿菌作為微生物農藥，做了相關研究。

（1）研究者用_________酶處理蛋白A基因和pET質粒，得到重組質粒，再將重組質粒置于感受態(tài)大腸桿菌細胞懸液中，獲得轉基因大腸桿菌。

（2）檢測發(fā)現(xiàn)，轉入的蛋白A基因在大腸桿菌細胞中表達效率很低，研究者推測不同生物對密碼子具有不同的偏好，因而設計了與蛋白A基因結合的兩對引物（引物B和C中都替換了一個堿基），并按圖2方式依次進行4次PCR擴增，以得到新的蛋白A基因。

①這是一種定點的_________技術。

②圖2所示的4次PCR應該分別如何選擇圖1中所示的引物？請?zhí)顚懸韵卤砀瘢ㄈ暨x用該引物劃“√”，若不選用該引物則劃“×”）_________。

	引物A	引物B	引物C	引物D
PCR1
PCR2
PCR3
PCR4

（3）研究者進一步將含有新蛋白A基因的重組質粒、_________和pET質粒分別導入大腸桿菌，提取培養(yǎng)液中的蛋白質，用_________方法檢測并比較三組受體菌蛋白A的表達產物，判斷新蛋白A基因表達效率是否提高。為檢測表達產物的生物活性，研究者將上述各組表達產物加入到長滿了植物病菌的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時間后，比較抑菌圈的大小，以確定表達產物的____________。

（4）作為微生物農藥，使用時常噴灑蛋白A基因的發(fā)酵產物而不是轉蛋白A基因的大腸桿菌，其優(yōu)點是_________。

Answer 1

【答案】限制酶和DNA連接 基因突變

	引物A	引物B	引物C	引物D
PCR1	√	√	×	×
PCR2	×	×	√	√
PCR3	×	×	×	×
PCR4	√	×	×	√

含有蛋白A基因的重組質粒 抗原-抗體雜交 生物活性大小 對人、畜、農作物和自然環(huán)境安全；不會造成基因污染；有效成分純度較高

【解析】

基因工程的步驟包括目的基因的獲取、基因表達載體的構建、把目的基因導入受體細胞、目的基因的檢測和鑒定等。

（1）在基因工程中，需要用限制酶分別對蛋白A基因和pET質粒進行切割，再用DNA連接酶處理獲得得到重組質粒。

（2）①根據(jù)題意和圖示分析，經過4次PCR技術后獲得了新的基因，這是一種定點的基因突變技術。

②根據(jù)每輪循環(huán)獲得的產物可知，PCR1用引物A和B處理，PCR2用引物C和D處理，PCR3不需要用引物處理，根據(jù)堿基互補配對原則即可以獲得相應的產物；PCR4用引物A和D處理，可以獲得新的蛋白A基因。如圖所示：

	引物A	引物B	引物C	引物D
PCR1	√	√	×	×
PCR2	×	×	√	√
PCR3	×	×	×	×
PCR4	√	×	×	√

（3）將含有新蛋白A基因的重組質粒和含有蛋白A基因的重組質粒、空質粒（pET質粒）分別導入大腸桿菌，提取培養(yǎng)液中的蛋白質，用抗原-抗體雜交方法檢測并比較三組受體菌蛋白A的表達產物，判斷新蛋白A基因表達效率是否提高。將上述各組表達產物加入到長滿了植物病菌的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時間后，比較抑菌圈的大小，可以確定表達產物的生物活性大小。

（4）由于蛋白A基因的發(fā)酵產物對人、畜、農作物和自然環(huán)境安全；不會造成基因污染；有效成分純度較高，故使用時常噴灑蛋白A基因的發(fā)酵產物而不是轉蛋白A基因的大腸桿菌。