Question

17．在農(nóng)業(yè)用地中發(fā)現(xiàn)一種廣泛使用的除草劑（含氮有機(jī)化合物 ）在土壤中不易降解，長(zhǎng)期使用可污染土壤．為修復(fù)被該除草劑污染的土壤，可按下面程序選育能降解該除草劑的細(xì)菌（已知該除草劑在水中溶解度一定，該除草劑的培養(yǎng)基不透明）．

（1）制備土壤浸出液時(shí)，為避免菌體濃度過高，需將浸出液進(jìn)行稀釋處理．
（2）要從長(zhǎng)期使用該除草劑的土壤中分離目的菌，上述培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基的特點(diǎn)是：固體培養(yǎng)基且以除草劑作唯一氮源．若需要調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH，應(yīng)該在各種成分都溶化后且分裝前（填“前”或“后”）進(jìn)行．對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，常采用的方法是高壓蒸汽滅菌．
（3）培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)，只有很少菌落出現(xiàn)，大部分細(xì)菌在此培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)的主要原因是培養(yǎng)基中缺少這些細(xì)菌可利用的氮源或有氧條件抑制了這些細(xì)菌的生長(zhǎng)．
（4）在固體培養(yǎng)基上形成的菌落中，無透明帶菌落利用的氮源主要是氮?dú)�，有透明帶菌落利用的氮源主要是該除草劑，�?jù)此可篩選出目的菌．
（5）若要統(tǒng)計(jì)某土壤樣品中該活菌數(shù)目，宜采用稀釋涂布平板法．
①測(cè)定該菌數(shù)時(shí)，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為10⁶的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確可信的是D，理由是在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一定要涂布至少三個(gè)平板，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性；一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)．
A．一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是230
B．兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是220和260，取平均值240
C．三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是210、50和520，取平均值260
D．四個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是210、300、240和250，取平均值250
②一同學(xué)在稀釋倍數(shù)為10⁵的培養(yǎng)基中測(cè)得平板上菌落數(shù)的平均值為234，那么每毫升樣品中的菌落數(shù)是2.34×10⁸個(gè)（涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.1mL）．
③用這種方法測(cè)定的大腸桿菌菌落數(shù)比實(shí)際活菌數(shù)量少，因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的是一個(gè)菌落．

Answer 1

分析 分析題圖：該實(shí)驗(yàn)是從土壤中篩選分離能降解除草劑的微生物的過程．這樣的實(shí)驗(yàn)要將土壤稀釋處理，以除草劑為唯一的氮源進(jìn)行處理篩選土壤微生物，以菌落計(jì)數(shù)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)計(jì)數(shù)．

解答 解：（1）制備土壤浸出液時(shí)，為避免菌體濃度過高，需將浸出液進(jìn)行稀釋處理．
（2）要從長(zhǎng)期使用該除草劑的土壤中分離目的菌，上述培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基的特點(diǎn)是：固體培養(yǎng)基且以除草劑作唯一氮源．若需要調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH，應(yīng)該在各種成分都溶化后且分裝前進(jìn)行．對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌常采用高壓蒸汽滅菌法．
（3）在以該除草劑為唯一氮源的培養(yǎng)基上，不能降解該除草劑的細(xì)菌（除具有固氮能力的細(xì)菌外）是不能生長(zhǎng)的．
（4）根據(jù)題中信息“含除草劑的培養(yǎng)基不透明”，則可知無透明帶菌落利用的氮源并不是除草劑，而是來自空氣中的氮?dú)�，有透明帶菌落利用的氮源為除草劑�?br />（5）接種微生物常用平板劃線法和稀釋涂布平板法，其中稀釋涂布平板法還可用于對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)．
①在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一定要涂布至少三個(gè)平板，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性，而且一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)．
②在稀釋倍數(shù)為10⁵的培養(yǎng)基中測(cè)得平板上菌落數(shù)的平均值為234，涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.1mL，因此每毫升樣品中的菌落數(shù)是234÷0.1×10⁵=2.34×10⁸．
③涂布時(shí)，當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的是一個(gè)菌落，這樣使測(cè)定的大腸桿菌菌落數(shù)比實(shí)際活菌數(shù)量少．
故答案為：
（1）稀釋  
（2）以除草劑作唯一氮源　前　高壓蒸汽滅菌
（3）培養(yǎng)基中缺少這些細(xì)菌可利用的氮源   
（4）氮?dú)狻≡摮�草�?br />（5）稀釋涂布平板  
①D　在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一定要涂布至少三個(gè)平板，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性；一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)　
②2.34×10⁸　
③少　當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的是一個(gè)菌落

點(diǎn)評(píng) 據(jù)圖分析本題考查微生物培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)，意在考查實(shí)驗(yàn)?zāi)康�、原理、方法和操作步驟，掌握相關(guān)的操作技能，并能將這些實(shí)驗(yàn)涉及的方法和技能進(jìn)行綜合運(yùn)用及實(shí)驗(yàn)分析能力．