（16分）下面是在農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒基礎(chǔ)上構(gòu)建的植物抗蟲(chóng)基因表達(dá)載體的示意圖。請(qǐng)據(jù)圖回答：

（1）為了擴(kuò)大基因表達(dá)載體的數(shù)量，需將基因表達(dá)載體再植入農(nóng)桿菌中并對(duì)農(nóng)桿菌進(jìn)行培養(yǎng)，此時(shí)，在培養(yǎng)農(nóng)桿菌的培養(yǎng)基中應(yīng)加入              ，該培養(yǎng)基按用途劃分屬于 。

（2）帶有抗蟲(chóng)基因的農(nóng)桿菌進(jìn)入棉花細(xì)胞后，要檢測(cè)抗蟲(chóng)基因是否插入到棉花的染色體DNA上，常用的方法是               ；要檢測(cè)抗蟲(chóng)基因在棉花體內(nèi)是否翻譯成蛋白質(zhì)，必需先從轉(zhuǎn)基因棉花中提取蛋白質(zhì)，再用相應(yīng)的   方法來(lái)確定是否已形成毒蛋白；如果在個(gè)體水平上鑒定抗蟲(chóng)基因是否轉(zhuǎn)化成功，可以通過(guò)   實(shí)驗(yàn)來(lái)實(shí)現(xiàn)。

（3）Ti質(zhì)粒的分子大小有200kb（千堿基對(duì)）左右，然而能進(jìn)入植物細(xì)胞的只有一小部分約25kb（稱為T(mén)—DNA）。在這一小部分的兩端各有一個(gè)25bp（堿基對(duì)）長(zhǎng)的重復(fù)序列LB和RB，這兩個(gè)序列對(duì)這一小部分DNA進(jìn)入植物細(xì)胞是不可缺少的。實(shí)驗(yàn)證明只要Ti質(zhì)粒上保留了這兩個(gè)序列，即使這兩個(gè)序列之間的其它序列被不同程度地改變（如插入一個(gè)外源DNA片段），這一小部分也仍然可以轉(zhuǎn)移并整合到植物的基因組中。

①  在構(gòu)建的T—DNA過(guò)程中，還應(yīng)該具有和  等結(jié)構(gòu)，才能保證進(jìn)入植物體的抗蟲(chóng)基因能夠順利表達(dá)。

②Ti質(zhì)粒不同于其它質(zhì)粒的最大特點(diǎn)就是它含有T—DNA，如果給你一個(gè)不含T—DNA的質(zhì)粒，你如何把它構(gòu)建成含有T—DNA的質(zhì)粒？               。

 

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科目：高中生物 來(lái)源：黑龍江省哈六中2010-2011學(xué)年高二下學(xué)期期中考試生物試題 題型：071

下面是在農(nóng)桿菌Ti質(zhì)�；A(chǔ)上構(gòu)建的植物抗蟲(chóng)基因表達(dá)載體的示意圖。請(qǐng)據(jù)圖回答：

（1）為了擴(kuò)大基因表達(dá)載體的數(shù)量，需將基因表達(dá)載體再植入農(nóng)桿菌中并對(duì)農(nóng)桿菌進(jìn)行培養(yǎng)，此時(shí)，在培養(yǎng)農(nóng)桿菌的培養(yǎng)基中應(yīng)加入________，該培養(yǎng)基按用途劃分屬于________。

（2）帶有抗蟲(chóng)基因的農(nóng)桿菌進(jìn)入棉花細(xì)胞后，要檢測(cè)抗蟲(chóng)基因是否插入到棉花的染色體DNA上，常用的方法是________；要檢測(cè)抗蟲(chóng)基因在棉花體內(nèi)是否翻譯成蛋白質(zhì)，必需先從轉(zhuǎn)基因棉花中提取蛋白質(zhì)，再用相應(yīng)的________方法來(lái)確定是否已形成毒蛋白；如果在個(gè)體水平上鑒定抗蟲(chóng)基因是否轉(zhuǎn)化成功，可以通過(guò)________實(shí)驗(yàn)來(lái)實(shí)現(xiàn)。

（3）Ti質(zhì)粒的分子大小有200 kb（千堿基對(duì)）左右，然而能進(jìn)入植物細(xì)胞的只有一小部分約25 kb（稱為T(mén)－DNA）。在這一小部分的兩端各有一個(gè)25 bp（堿基對(duì)）長(zhǎng)的重復(fù)序列LB和RB，這兩個(gè)序列對(duì)這一小部分DNA進(jìn)入植物細(xì)胞是不可缺少的。實(shí)驗(yàn)證明只要Ti質(zhì)粒上保留了這兩個(gè)序列，即使這兩個(gè)序列之間的其它序列被不同程度地改變（如插入一個(gè)外源DNA片段），這一小部分也仍然可以轉(zhuǎn)移并整合到植物的基因組中。

①在構(gòu)建的T－DNA過(guò)程中，還應(yīng)該具有________和________等結(jié)構(gòu)，才能保證進(jìn)入植物體的抗蟲(chóng)基因能夠順利表達(dá)。

②Ti質(zhì)粒不同于其它質(zhì)粒的最大特點(diǎn)就是它含有T－DNA，如果給你一個(gè)不含T－DNA的質(zhì)粒，你如何把它構(gòu)建成含有T－DNA的質(zhì)粒？________。

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科目：高中生物 來(lái)源：福建省三明一中2012屆高三第二次學(xué)段考生物試題 題型：071

下面是一項(xiàng)“利用轉(zhuǎn)基因番茄生產(chǎn)人胰島素的方法”的專利摘要，請(qǐng)回答：

發(fā)明利用轉(zhuǎn)基因番茄作為生物反應(yīng)器生產(chǎn)人胰島素。所用的人胰島素基因是依據(jù)植物偏愛(ài)密碼子的原則來(lái)設(shè)計(jì)所含的密碼子，通過(guò)人工合成若干DNA片段，拼接而成，并且在C端加上KDEL的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留序列，避免胰島素在植物細(xì)胞中的降解。將該基因置于CaMV 35S啟動(dòng)子和果實(shí)專一性啟動(dòng)子2A12的驅(qū)動(dòng)之下通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法轉(zhuǎn)入番茄中，在番茄的果實(shí)中表達(dá)人胰島素。

（1）此基因工程中的目的基因是_________，將人工合成的DNA片段拼接在一起，所需要的酶有_________。

（2）要想在體外獲得大量該目的基因的片段，可以采用_________技術(shù)。

（3）試分析在C端加上KDEL的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留序列，為什么可以避免胰島素在植物細(xì)胞中的降解？_________。

（4）用目的基因與農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒結(jié)合構(gòu)建表達(dá)載體，該表達(dá)載體的組成中不應(yīng)含有的是_________（從下列選項(xiàng)中選擇）。

①目的基因

②CaMV 35S啟動(dòng)子

③果實(shí)專一性啟動(dòng)子2A12

④RNA引物

⑤標(biāo)記基因

⑥T-DNA

⑦RNA聚合酶基因片段

⑧終止子

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科目：高中生物 來(lái)源：2014屆天津市六校高三上學(xué)期第一次聯(lián)考生物試卷（解析版） 題型：綜合題

（16分）Ⅰ.（8分）土壤農(nóng)桿菌是一種能引起雙子葉植物產(chǎn)生冠癭瘤的土壤細(xì)菌，它帶有一個(gè)大的質(zhì)粒叫Ti質(zhì)粒，它是攜帶細(xì)菌DNA向宿主植物基因組轉(zhuǎn)化所需信息的重要片段，只有T—DNA片段才轉(zhuǎn)入植物細(xì)胞的基因組。結(jié)構(gòu)及轉(zhuǎn)化過(guò)程如圖所示，回答相關(guān)問(wèn)題：

（1）為了使某種植物具有抗旱性狀而又不引起植物產(chǎn)生冠癭瘤，需對(duì)Ti質(zhì)粒進(jìn)行修飾，即祛除瘤基因，將抗旱基因轉(zhuǎn)移至________，然后在一定條件下將外植體在含土壤農(nóng)桿菌的稀釋培養(yǎng)基上培養(yǎng)，此時(shí)修飾的T—DNA轉(zhuǎn)入植物細(xì)胞并整合到植物基因組中。以上過(guò)程需要的工具有                                          。

（2）將上述外植體置于一個(gè)含有某種抗生素的合適培養(yǎng)基中進(jìn)行篩選，發(fā)生轉(zhuǎn)化的外植體開(kāi)始增殖，形成________      ，通過(guò)產(chǎn)生不定芽再長(zhǎng)出整個(gè)植物。

（3）基因轉(zhuǎn)化是否成功應(yīng)對(duì)轉(zhuǎn)基因植物進(jìn)行鑒定，可以直接在________水平對(duì)轉(zhuǎn)基因植物與非轉(zhuǎn)基因植物進(jìn)行比較。

Ⅱ．（8分）請(qǐng)回答基因工程方面的有關(guān)問(wèn)題：

(1)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，其原理與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制類(lèi)似（如圖所示）。

（1）圖中引物為單鏈DNA片段，它是子鏈合成延伸的基礎(chǔ)。

①?gòu)睦碚撋贤茰y(cè)，第四輪循環(huán)產(chǎn)物中不含有引物B的DNA片段所占的比例為      。

②在第    輪循環(huán)產(chǎn)物中首次出現(xiàn)兩條脫氧核苷酸鏈等長(zhǎng)的DNA片段。

（2）PCR反應(yīng)體系中含有的DNA聚合酶具有           特點(diǎn)，下面的表達(dá)式不能正確反映DNA聚合酶的功能，這是因?yàn)?u>                   。

 

 

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科目：高中生物 來(lái)源：2010～2011學(xué)年度黑龍江省哈六中高二下學(xué)期期中考試生物試卷 題型：綜合題

（16分）下面是在農(nóng)桿菌Ti質(zhì)�；A(chǔ)上構(gòu)建的植物抗蟲(chóng)基因表達(dá)載體的示意圖。請(qǐng)據(jù)圖回答：

（1）為了擴(kuò)大基因表達(dá)載體的數(shù)量，需將基因表達(dá)載體再植入農(nóng)桿菌中并對(duì)農(nóng)桿菌進(jìn)行培養(yǎng)，此時(shí)，在培養(yǎng)農(nóng)桿菌的培養(yǎng)基中應(yīng)加入             ，該培養(yǎng)基按用途劃分屬于。
（2）帶有抗蟲(chóng)基因的農(nóng)桿菌進(jìn)入棉花細(xì)胞后，要檢測(cè)抗蟲(chóng)基因是否插入到棉花的染色體DNA上，常用的方法是              ；要檢測(cè)抗蟲(chóng)基因在棉花體內(nèi)是否翻譯成蛋白質(zhì)，必需先從轉(zhuǎn)基因棉花中提取蛋白質(zhì)，再用相應(yīng)的  方法來(lái)確定是否已形成毒蛋白；如果在個(gè)體水平上鑒定抗蟲(chóng)基因是否轉(zhuǎn)化成功，可以通過(guò)  實(shí)驗(yàn)來(lái)實(shí)現(xiàn)。
（3）Ti質(zhì)粒的分子大小有200kb（千堿基對(duì)）左右，然而能進(jìn)入植物細(xì)胞的只有一小部分約25kb（稱為T(mén)—DNA）。在這一小部分的兩端各有一個(gè)25bp（堿基對(duì)）長(zhǎng)的重復(fù)序列LB和RB，這兩個(gè)序列對(duì)這一小部分DNA進(jìn)入植物細(xì)胞是不可缺少的。實(shí)驗(yàn)證明只要Ti質(zhì)粒上保留了這兩個(gè)序列，即使這兩個(gè)序列之間的其它序列被不同程度地改變（如插入一個(gè)外源DNA片段），這一小部分也仍然可以轉(zhuǎn)移并整合到植物的基因組中。
① 在構(gòu)建的T—DNA過(guò)程中，還應(yīng)該具有和 等結(jié)構(gòu)，才能保證進(jìn)入植物體的抗蟲(chóng)基因能夠順利表達(dá)。
②Ti質(zhì)粒不同于其它質(zhì)粒的最大特點(diǎn)就是它含有T—DNA，如果給你一個(gè)不含T—DNA的質(zhì)粒，你如何把它構(gòu)建成含有T—DNA的質(zhì)粒？              。

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