Question

【題目】回答下列（一）、（二）小題：

（一）某同學(xué)用新鮮的泡菜汁為實(shí)驗(yàn)材料分離純化出乳酸菌，用來生產(chǎn)酸奶。分離純化所用固體培養(yǎng)基中因含有碳酸鈣而不透明，乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣。

（1）分離純化乳酸菌時，首先需要用__________對泡菜汁進(jìn)行梯度稀釋，然后采用__________法進(jìn)行分離，可獲得乳酸菌的單菌落。

（2）推測分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用有__________和__________。分離純化時應(yīng)挑選出__________的菌落作為候選菌。

（3）獲得純化的乳酸菌后，可以利用純牛奶作為原料制作酸奶，發(fā)酵常在__________（A．有氧+常溫 B．無氧+常溫 C．有氧+低溫 D．無氧+低溫）條件下進(jìn)行。如果使用的是加了某些抗生素的純牛奶作原料制酸奶，很有可能會發(fā)酵成怪味“酸奶”，其原因可能是__________。

（二）科學(xué)家用轉(zhuǎn)基因方法培育“巨型小鼠”。圖1為含大鼠生長激素基因的DNA及限制酶切割位點(diǎn)示意圖；圖2為含有相應(yīng)標(biāo)記基因和限制酶切割位點(diǎn)的質(zhì)粒示意圖，其中nptII為卡那霉素抗性基因，Tc為四環(huán)素抗性基因，lacZ為藍(lán)色顯色基因，復(fù)制原點(diǎn)是質(zhì)粒上必需的一段復(fù)制起始的序列，與重組質(zhì)粒的自主復(fù)制有關(guān)。圖3是轉(zhuǎn)基因過程中的一個步驟。

（1）根據(jù)圖1，在獲得目的基因時，應(yīng)使用限制酶__________（PvuⅠ / EcoRⅠ）進(jìn)行切割�？梢赃x擇圖2中的質(zhì)粒__________（A / B）作為目的基因的載體，理由是__________。

（2）圖3表示基因工程中將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞的過程，該步驟采用的技術(shù)方法是__________，通常選擇__________作為受體細(xì)胞。

（3）獲得含目的基因的細(xì)胞后，該細(xì)胞需要進(jìn)行__________。然后再進(jìn)行移植，通常移植最適宜的時期是發(fā)育到__________（A．2細(xì)胞胚胎 B．4細(xì)胞胚胎 C．早期囊胚 D．原腸胚）。再經(jīng)分娩產(chǎn)仔就可以獲得“巨型小鼠”。

Answer 1

【答案】 無菌水 涂布分離 鑒別乳酸菌 中和產(chǎn)生的乳酸(或酸) 具有透明圈 B 抗生素具有殺菌作用，會殺死乳酸菌，導(dǎo)致乳酸發(fā)酵不能順利進(jìn)行 Pvu I A 選擇質(zhì)粒A，其復(fù)制原點(diǎn)則不會被限制酶切割，復(fù)制原點(diǎn)序列保持完整（在用切割目的基因的限制酶切割質(zhì)粒B時，其復(fù)制原點(diǎn)會被限制酶切割，從而影響重組質(zhì)粒的自主復(fù)制） 顯微注射法 受精卵 胚胎體外培養(yǎng) C

【解析】【試題分析】

本題考查微生物的分離純化與培養(yǎng)，以及基因工程的相關(guān)知識，意在考查考生識圖能力和理解所學(xué)知識的要點(diǎn)，把握知識間的內(nèi)在聯(lián)系的能力。題目比較基礎(chǔ)，只要認(rèn)真審題和讀圖并獲取有用信息，再結(jié)合題目內(nèi)容梳理所學(xué)基礎(chǔ)知識，即可順利作答。

（一）（1）乳酸菌屬于厭氧菌，可用稀釋涂布平板法分離純化乳酸菌。具體操作為首先需要用無菌水對泡菜汁進(jìn)行梯度稀釋，然后采用涂布分離法進(jìn)行分離，可獲得乳酸菌的單菌落。

（2）在分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用有中和乳酸菌代謝過程中產(chǎn)生的乳酸和利于乳酸菌的鑒別和分離；分離純化所用固體培養(yǎng)基中因含有碳酸鈣而不透明，乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣，因此，分離純化時應(yīng)挑選出具有透明圈的菌落作為候選菌。

（3）乳酸菌屬于厭氧型生物，其無氧呼吸可產(chǎn)生乳酸，而且低溫會抑制與無氧呼吸有關(guān)酶的催化活性，所以獲得純化的乳酸菌后，制作酸奶的發(fā)酵常在“無氧+常溫”條件下進(jìn)行，故B項正確；抗生素具有殺菌作用，會殺死乳酸菌，導(dǎo)致乳酸發(fā)酵不能順利進(jìn)行，因此，如果使用的是加了某些抗生素的純牛奶作原料制酸奶，很有可能會發(fā)酵成怪味“酸奶”。

（二）（1）分析題圖1可以發(fā)現(xiàn)，限制酶EcoRⅠ的切割位點(diǎn)處于目的基因中，而限制酶PvuⅠ的切割位點(diǎn)正好位于目的基因兩端，所以在獲得目的基因時，應(yīng)使用限制酶PvuⅠ進(jìn)行切割；分析圖2可知，質(zhì)粒A中的復(fù)制原點(diǎn)不會被限制酶切割，復(fù)制原點(diǎn)序列保持完整，而在用切割目的基因的限制酶PvuⅠ切割質(zhì)粒B時，其復(fù)制原點(diǎn)會被限制酶切割，從而影響重組質(zhì)粒的自主復(fù)制，因此，可以選擇圖2中的質(zhì)粒A作為目的基因的載體。

（2）圖3表示基因工程中將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞的過程，該步驟采用的技術(shù)方法是顯微注射法，通常選擇動物的受精卵作為受體細(xì)胞。

（3）獲得含目的基因的細(xì)胞后，該細(xì)胞需要進(jìn)行胚胎體外培養(yǎng)，然后再進(jìn)行移植；通常移植最適宜的時期是發(fā)育到C早期囊胚，再經(jīng)分娩產(chǎn)仔就可以獲得“巨型小鼠”。