Question

【題目】下表是幾種限制酶識別序列及其切割位點，圖1、圖2中標注了相關限制酶的酶切位點，其中切割位點相同的酶不重復標注．請回答下列問題：

限制酶	BamHⅠ	BclⅠ	Sau3AⅠ	HindⅢ
識別序列及切割位點

（1）用圖中質粒和目的基因構建重組質粒，應選__________兩種限制酶切割，酶切后的載體和目的基因片段，通過DNA連接酶作用后獲得重組質粒．為了擴增重組質粒，需將其轉入處于_____態(tài)的大腸桿菌．

（2）為了篩選出轉入了重組質粒的大腸桿菌，應在篩選平板培養(yǎng)基中添加___平板上長出的菌落，常用PCR鑒定，所用的引物組成為圖2中___．

（3）若BamH I酶切的DNA末端與Bcl I酶切的DNA末端連接，連接部位的6個堿基對序列為 _______，對于該部位，這兩種酶 ______（填“都能”、“都不能”或“只有一種能”）切開．

（4）若用Sau3AI切圖1質粒最多可能獲得______種大小不同的DNA片段．

Answer 1

【答案】BclⅠ和HindⅢ 感受 四環(huán)素 引物甲和引物丙 TGATCC或 GGATCA ACTAGG CCTAGT 都不能 7

【解析】

本題考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟的相關細節(jié)，能結合所學的知識準確答題，旨在考查考生信息獲取的能力與知識的遷移運用能力。

（1）選擇的限制酶應在目的基因兩端存在識別位點，但BamHⅠ會破壞標記基因，因此只能選BclI和HindⅢ兩種限制酶切割；酶切后的載體和目的基因片段，通過DNA連接酶作用后獲得重組質粒，為了擴增重組質粒，需將其轉入處于感受態(tài)的大腸桿菌；
（2）由于構建重組質粒時，氨芐青霉素抗性基因被破壞，而四環(huán)素抗性基因沒有被破壞，故為篩選出轉入重組質粒的大腸桿菌，應在篩選平板培養(yǎng)基中添加四環(huán)素；PCR技術要求兩種引物分別和目的基因的兩條單鏈結合，沿相反的方向合成子鏈，故所用的引物組成為圖2中引物甲和引物丙；
（3）根據(jù)BamHⅠ和BclI的酶切位點，若BamHI酶切的DNA末端與BclI酶切的DNA末端連接，則連接部位的6個堿基對序列為，對于該部位，由于與兩種酶的酶切位點均不同，故這兩種酶都不能切開；

（4）根據(jù)BamHⅠ、BclI和Sau3AI的酶切位點，Sau3AI在質粒上有三個酶切位點，完全酶切可得到記為A、B、C三種片段，若部分位點被切開，可得到AB、AC、BC、ABC四種片段，所以用Sau3AI切圖1質粒最多可能獲得7種大小不同的DNA片段。