Question

【題目】EPO是促紅細(xì)胞生成素（Erythropoietin）的英文簡稱，是一種激素樣物質(zhì)，可促進(jìn)體內(nèi)新紅細(xì)胞生成。人類已可通過基因工程合成EPO基因，并采用中國倉鼠卵巢（CHO）細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)來獲取產(chǎn)物。其過程如下：

請(qǐng)回答下列問題：

（1）從人體組織中提取EPO的mRNA，通過逆轉(zhuǎn)錄得到 ，再通過PCR技術(shù)獲得大量EPO基因。

（2）供體母鼠通常情況下每次排卵8～12枚，為使其超數(shù)排卵，需注射 激素以排出更多的卵子，培養(yǎng)到 時(shí)期與獲能的精子相遇時(shí)，精子首先發(fā)生 反應(yīng)，穿越放射冠和透明帶，完成體外受精。

（3）①過程構(gòu)成了基因表達(dá)載體，內(nèi)部包括不可缺少的組成部分，其中 能驅(qū)動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄。

（4）采用 技術(shù)，將重組表達(dá)載體導(dǎo)入小鼠受精卵中，將受精卵移入發(fā)育培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)液成分除一些無機(jī)鹽和有機(jī)鹽類外，還需添加 、激素、氨基酸、核苷酸等營養(yǎng)成分，以及血清（血漿）等物質(zhì)。

（5）當(dāng)胚胎發(fā)育至 時(shí)期，向受體移植，為獲得更多個(gè)轉(zhuǎn)基因胚胎，要將 均等切割，否則會(huì)影響分割后胚胎的恢復(fù)和進(jìn)一步發(fā)育。此外，移植前需對(duì)已成功轉(zhuǎn)入目的基因的胚胎進(jìn)行 。

（6）若想檢驗(yàn)轉(zhuǎn)基因倉鼠是否成功表達(dá)EPO，可以采用 技術(shù)對(duì)血液來進(jìn)行檢測(cè)。

Answer 1

【答案】（1）cDNA

（2）促性腺 減數(shù)第二次分裂中期 頂體

（3）啟動(dòng)子

（4）顯微注射技術(shù) 維生素

（5）桑椹胚或囊胚 內(nèi)細(xì)胞團(tuán) 性別鑒定

（6）抗原抗體雜交

【解析】

試題分析：（1）可通過反轉(zhuǎn)錄法獲取目的基因。故從人體組織中提取EPO的mRNA，通過逆轉(zhuǎn)錄可得到控制EPO合成的cDNA，再通過PCR技術(shù)獲得大量EPO基因。

（2）為使供體母鼠超數(shù)排卵，需注射促性腺激素。卵子要培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期才具有受精能力。減數(shù)第二次分裂中期的卵母細(xì)胞與獲能的精子相遇時(shí)，精子首先發(fā)生頂體反應(yīng)，穿越放射冠和透明帶，完成體外受精。

（3）基因表達(dá)載體包括啟動(dòng)子、終止子、目的基因和標(biāo)記基因。其中啟動(dòng)子為RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)，能驅(qū)動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄。

（4）將重組表達(dá)載體導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞中常采用顯微注射技術(shù)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)液成分除一些無機(jī)鹽和有機(jī)鹽之外，還需添加維生素、激素、氨基酸、核苷酸等營養(yǎng)成分，以及動(dòng)物血清或血漿等物質(zhì)。

（5）胚胎移植一般選用處于桑椹胚或囊胚時(shí)期的胚胎，為獲得更多個(gè)轉(zhuǎn)基因胚胎，可采用胚胎分割技術(shù)，要將囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割，否則會(huì)影響分割后胚胎的恢復(fù)和進(jìn)一步發(fā)育。因需借助轉(zhuǎn)基因倉鼠的卵巢獲得產(chǎn)物，故移植前需對(duì)已成功轉(zhuǎn)入目的基因的胚胎進(jìn)行性別鑒定，選擇雌性胚胎進(jìn)行移植。

（6）檢測(cè)是否合成蛋白質(zhì)，用抗原—抗體雜交法。故若想檢驗(yàn)轉(zhuǎn)基因倉鼠是否成功表達(dá)EPO，可以采用抗原—抗體雜交技術(shù)對(duì)血液來進(jìn)行檢測(cè)。