Question

【題目】科學家將外源目的基因與大腸桿菌的質(zhì)粒進行重組，并在大腸桿菌中成功表達。下圖表示構(gòu)建重組質(zhì)粒和篩選含目的基因的大腸桿菌的過程。請據(jù)圖回答：

（1）步驟①和②中常用的工具酶是 。

（2）經(jīng)過①和②步驟后，有些質(zhì)粒上的 基因內(nèi)插入了外源目的基因，形成重組質(zhì)粒。

（3）步驟③是 的過程。為了促進該過程，應該用 處理大腸桿菌。

（4）步驟④：將三角瓶內(nèi)的大腸桿菌接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基C上培養(yǎng)，目的是篩選 。能在C中生長的大腸桿菌有 種。

（5）步驟⑤:用無菌牙簽挑取C上的單個菌落，分別接種到D（含氨芐青霉素和四環(huán)素）和E（含四環(huán)素）兩個培養(yǎng)基的相同位置上，一段時間后，菌落的生長狀況如圖所示。含目的基因的菌落位于（選填“D”或“E”） 上，請在圖中相應的位置上圈出來。

Answer 1

【答案】（1）限制性內(nèi)切酶、DNA連接酶

（2）氨芐青霉素抗性

（3）將重組質(zhì)粒（目的基因）導入大腸桿菌（受體細胞） CaCl2溶液

（4）含四環(huán)素抗性基因的大腸桿菌 2種

（5）E

【解析】試題（1）將質(zhì)粒切割開用限制酶，將目的基因與質(zhì)粒連接起來用DNA連接酶．

（2）由圖中限制酶切割位置可知，目的基因插入的位置是氨芐青霉素抗性基因中．

（3）步驟③是基因工程第三步：將目的基因?qū)�入受體細胞．

（4）培養(yǎng)基C是選擇培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中有四環(huán)素，專一篩選含四環(huán)素抗性基因的大腸桿菌，能在C中生長的大腸桿菌有兩種，分別是抗四環(huán)素和同時抗四環(huán)素和含氨芐青霉素的大腸桿菌．

（5）D培養(yǎng)基中大腸桿菌對四環(huán)素和含氨芐青霉素都抗，而E中只抗一種四環(huán)素，所以在E中對應區(qū)域（D中沒有菌落的部位），該處為轉(zhuǎn)基因大腸桿菌．