Question

5．下面是以小鼠為對象進行的各項研究工作，請分析回答問題．
（1）在小鼠細胞培養(yǎng)過程中，當貼壁細胞分裂生長到細胞表面相互接觸時，細胞會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細胞的接觸抑制．此時，瓶壁上形成細胞層數(shù)是1層．通常將多孔的中空薄壁小玻璃珠放入培養(yǎng)瓶中可以擴大細胞貼壁生長的附著面積，增加培養(yǎng)的細胞數(shù)量，也有利于空氣交換．用有關的酶使貼壁的細胞從瓶壁上分離下來，重新配置細胞懸液后進行分瓶培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)．
（2）如果體外受精后，在精核與卵核融合之前，用微型吸管除雄核，再用細胞松弛素B處理（作類似于用秋水仙素處理植物細胞），處理后的受精卵可發(fā)育成小鼠．這種方法在動物新品種選育中的顯著優(yōu)點是容易獲得純合子，縮短育種的年限
（3）細胞培養(yǎng)過程要求的環(huán)境是無菌、無毒，在細胞培養(yǎng)液中添加一定的抗生素，防止培養(yǎng)過程中的污染，此外還要定期更換培養(yǎng)液，以便清除代謝產(chǎn)物，防止細胞代謝產(chǎn)物積累對細胞自身造成危害．
（4）在細胞培養(yǎng)過程中，通常在-196℃液氮條件下保存細胞，因為在這種條件下，細胞中酶的活性降低，細胞的代謝速率降低．

Answer 1

分析 1、動物細胞培養(yǎng)的流程：取動物組織塊（動物胚胎或幼齡動物的器官或組織）→剪碎→用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個細胞→制成細胞懸液→轉入培養(yǎng)瓶中進行原代培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個細胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)．
2、動物細胞培養(yǎng)需要滿足以下條件：①無菌、無毒的環(huán)境；②營養(yǎng)；③溫度和pH；④氣體環(huán)境：95%空氣+5%CO₂．
3、動物細胞培養(yǎng)技術的應用：制備病毒疫苗、制備單克隆抗體、檢測有毒物質、培養(yǎng)醫(yī)學研究的各種細胞．

解答 解：（1）在小鼠細胞培養(yǎng)過程中，當貼壁細胞分裂生長到細胞表面相互接觸時，細胞會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細胞的接觸抑制．此時，瓶壁上形成細胞層數(shù)是1層．通常將多孔的中空薄壁小玻璃珠放入培養(yǎng)瓶中可以擴大細胞貼壁生長的附著面積，增加培養(yǎng)的細胞數(shù)量，也有利于空氣交換．用有關的酶使貼壁的細胞從瓶壁上分離下來，重新配置細胞懸液后進行分瓶培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)．
（2）如果體外受精后，在精核與卵核融合之前，用微型吸管除雄核，再用細胞松弛素B處理（作類似于用秋水仙素處理植物細胞），處理后的受精卵可發(fā)育成小鼠．這種方法在動物新品種選育中的顯著優(yōu)點是容易獲得純合子，縮短育種的年限．
（3）細胞培養(yǎng)過程要求的環(huán)境是無菌、無毒，在細胞培養(yǎng)液中添加一定的抗生素，防止培養(yǎng)過程中的污染，此外還要定期更換培養(yǎng)液，以便清除代謝產(chǎn)物，防止細胞代謝產(chǎn)物積累對細胞自身造成危害．
（4）在細胞培養(yǎng)過程中，通常在-196℃液氮條件下保存細胞，因為在這種條件下，細胞中酶的活性降低，細胞的代謝速率降低．
故答案為：
（1）接觸抑制    1層     擴大細胞貼壁生長的附著面積     傳代培養(yǎng)
（2）容易獲得純合子，縮短育種的年限
（3）無菌、無毒       抗生素      更換培養(yǎng)液
（4）-196℃液氮

點評 本題主要考查學生對知識的理解和分析能力．動物細胞培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基是液體培養(yǎng)基，其中通常含有葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清等．植物組織培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基，其中通常含有蔗糖、氨基酸、無機鹽和植物激素等．在利用動物組織細胞制備一定濃度的細胞懸液時常用胰蛋白酶，不能使用胃蛋白酶，因為胃蛋白酶需要在強酸環(huán)境下才能起作用，但這樣的環(huán)境不適于細胞生存．