Question

【題目】超氧化物歧化酶(SOD)是生物體內(nèi)重要的抗氧化酶，具有延緩衰老的功效。科研人員采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)入法將攜帶SOD基因的Ti質(zhì)粒導(dǎo)人胡蘿卜細(xì)胞中，成功培育出SOD基因的胡蘿卜新品種�；乜拖铝袉�(wèn)題:

（1）Ti質(zhì)粒是基因工程中常用的載體之一，作為運(yùn)載體必須具備的條件________（至少答兩點(diǎn)）

（2）________________________________是基因工程的核心步驟，在該步操作中需要將SOD基因與Ti質(zhì)粒的_________________區(qū)段結(jié)合。需要用________________________酶，并且將SOD基因置于_____________和______________之間。最終是否整合到胡蘿卜的某染色體上,可用可用________________________方法來(lái)鑒定，或直接測(cè)定該染色體的DNA序列

Answer 1

【答案】能自我復(fù)制基因表達(dá)載體的構(gòu)建；有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)；有特殊的標(biāo)記基因 基因表達(dá)載體的構(gòu)建 T-DNA 限制酶和DNA連接酶 啟動(dòng)子 終止子 DNA 分子雜交

【解析】

1、質(zhì)粒是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、獨(dú)立于細(xì)菌擬核DNA之外并具有自我復(fù)制能力的雙鏈環(huán)狀DNA分子。

2、作為運(yùn)載體必須具備的條件：①要具有限制酶的切割位點(diǎn)；②要有標(biāo)記基因(如抗性基因),以便于重組后重組子的篩選③能在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定存在并復(fù)制；④是安全的，對(duì)受體細(xì)胞無(wú)害，而且要易從供體細(xì)胞分離出來(lái)。

3、基因工程的步驟：①獲取目的基因（從基因組文庫(kù)中獲取或、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因）②基因表達(dá)載體的構(gòu)建（這也是基因工程的核心）③將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞（植物、動(dòng)物、微生物）④目的基因的檢測(cè)與鑒定 （DNA分子雜交技術(shù),分子雜交技術(shù)、抗原抗體雜交）。

(1)質(zhì)粒作為運(yùn)載體必須具備的條件：①要具有限制酶的切割位點(diǎn)；②要有標(biāo)記基因(如抗性基因),以便于重組后重組子的篩選③能在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定存在并復(fù)制；④是安全的，對(duì)受體細(xì)胞無(wú)害，而且要易從供體細(xì)胞分離出來(lái)。

(2)基因工程的核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建, 在該步操作中需要將SOD基因與Ti質(zhì)粒的T-DNA區(qū)段結(jié)合。目的基因與運(yùn)載體結(jié)合用到了限制酶和DNA連接酶�；�因表達(dá)載體的構(gòu)建是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳至下一代使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用，一個(gè)基因表達(dá)載體的組成是目的基因+啟動(dòng)子+終止子+標(biāo)記基因。檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子雜交技術(shù)。