Question

【題目】西瓜花葉病毒（WMV）主要侵害西瓜、甜瓜等各種瓜類作物，造成瓜類發(fā)病或減產(chǎn)。科研人員利用單克隆技術(shù)制備出抗WMV的特異性單抗，并以其為核心建立能快速有效地檢測(cè)WMV的方法，可用于田間西瓜花葉病毒病的診斷和檢測(cè)�；卮鹣铝袉栴}。

（1）以提純的WMV病毒作為抗原，對(duì)小鼠進(jìn)行免疫，常用化學(xué)誘導(dǎo)劑__________將小鼠的__________和骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合。

（2）可利用選擇培養(yǎng)基對(duì)融合細(xì)胞進(jìn)行初步篩選，需要淘汰的融合細(xì)胞為__________。隨后將選出的細(xì)胞多倍稀釋，接種在特定細(xì)胞培養(yǎng)板上，使這些單細(xì)胞克隆生長(zhǎng)，最終選出能穩(wěn)定分泌__________的雜交瘤細(xì)胞。

（3）將選出的雜交瘤細(xì)胞注入小鼠腹腔制備單抗腹水，一段時(shí)間后收集并純化腹水，進(jìn)行抗體效價(jià)和類型的測(cè)定。也可對(duì)克隆的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行____________，更能持久地得到單一的抗體。單抗比一般抗血清優(yōu)越得多，原因是____________。

（4）抗WMV的單克隆抗體還可作為特異性探針，利用__________方法找出能與探針特異性結(jié)合的基因表達(dá)產(chǎn)物，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)從抗病性強(qiáng)的西瓜植株中獲取抗病目的基因，該目的基因能否在其他植物體內(nèi)穩(wěn)定存在并遺傳的關(guān)鍵是___________。

Answer 1

【答案】聚乙二醇（或PEG） 脾臟細(xì)胞（B淋巴細(xì)胞） 融合的脾細(xì)胞一脾細(xì)胞、融合的瘤細(xì)胞一瘤細(xì)胞 抗WMV單克隆抗體 傳代培養(yǎng)（體外培養(yǎng)） 純度高、靈敏度高、識(shí)別抗原部位專一 抗原一抗體雜交 目的基因是否整合到受體細(xì)胞的染色體上

【解析】

1、單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行抗體檢測(cè)，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。

2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要滿足以下條件

①無菌、無毒的環(huán)境：培養(yǎng)液應(yīng)進(jìn)行無菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素，以防培養(yǎng)過程中的污染。此外，應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，防止代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害。
②營(yíng)養(yǎng)：合成培養(yǎng)基成分：糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無機(jī)鹽、微量元素等。通常需加入血清、血漿等天然成分。

③溫度：適宜溫度：哺乳動(dòng)物多是36.5℃+0.5℃；pH：7.2～7.4。

④氣體環(huán)境：95%空氣+5%CO2。O2是細(xì)胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。

3、單克隆抗體的作用：①作為診斷試劑：（最廣泛的用途）具有準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速的優(yōu)點(diǎn)。

②用于治療疾病和運(yùn)載藥物：主要用于治療癌癥，可制成“生物導(dǎo)彈”。

（1）以提純的WMV病毒作為抗原，對(duì)小鼠進(jìn)行免疫，可用物理、化學(xué)或生物方法誘導(dǎo)細(xì)胞融合，常用化學(xué)誘導(dǎo)劑聚乙二醇將小鼠的B淋巴細(xì)胞（漿細(xì)胞）和骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合。

（2）可利用選擇培養(yǎng)基對(duì)融合細(xì)胞進(jìn)行初步篩選，需要淘汰的融合細(xì)胞為激活的B淋巴細(xì)胞——激活的B淋巴細(xì)胞以及骨髓瘤細(xì)胞——骨髓瘤細(xì)胞，而保留融合的B細(xì)胞一瘤細(xì)胞即雜交瘤細(xì)胞；隨后將選出的細(xì)胞多倍稀釋，接種在特定細(xì)胞培養(yǎng)板上，使這些單細(xì)胞克隆生長(zhǎng)，最終選出能穩(wěn)定分泌特定抗體（抗WMV單克隆抗體）的雜交瘤細(xì)胞。

（3）將選出的雜交瘤細(xì)胞注入小鼠腹腔制備單抗腹水，一段時(shí)間后收集并純化腹水，進(jìn)行抗體效價(jià)和類型的測(cè)定。也可對(duì)克隆的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，更能持久地得到單一的抗體。單抗比一般抗血清優(yōu)越得多，其純度高、靈敏度高、識(shí)別抗原部位專一。

（4）抗WMV的單克隆抗體還可作為特異性探針，利用抗原一抗體雜交方法找出能與探針特異性結(jié)合的基因表達(dá)產(chǎn)物，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)從抗病性強(qiáng)的西瓜植株中獲取抗病目的基因，該目的基因能否在其他植物體內(nèi)穩(wěn)定存在并遺傳的關(guān)鍵是目的基因是否整合到受體細(xì)胞的染色體上。