Question

克隆豬成功率較低，與早期胚胎細胞的異常凋亡有關．Bcl2基因是細胞凋亡抑制基因，用PCR技術可以檢測該基因轉(zhuǎn)錄水平，進而了解該基因與不同胚胎時期細胞凋亡的關系．克隆豬的培育及該基因轉(zhuǎn)錄水平檢測流程如圖一．請回答：
（1）圖中重組細胞的細胞核來自

 

細胞，早期胚胎移入受體子宮后繼續(xù)發(fā)育，經(jīng)桑椹胚、囊胚和

 

胚最終發(fā)育為克隆豬．該過程的原理是

 

．
（2）在PCR過程中可檢測出cDNA中Bcl2 cDNA的分子數(shù)，進而計算總mRNA中Bcl2 mRNA的分子數(shù)，從而反映出Bcl2基因的轉(zhuǎn)錄水平．
①圖中X表示

 

過程．
②從基因組數(shù)據(jù)庫中查詢Bcl2 mRNA的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列設計合成

 

用于PCR擴增，PCR擴增過程需要

 

 酶．
（3）常用基因拼接技術研究豬的遺傳．圖二的酶M和酶N是兩種限制酶，圖中DNA片段只注明了黏性末端處的堿基種類，其它堿基的種類未作注明．

①酶M特異性剪切的DNA片段是 ，則酶N特異性剪切的DNA片段是

 

．
②多個片段乙和多個片段丁混合在一起，用

 

酶拼接得到環(huán)狀DNA，其中只由兩個DNA片段連接成的環(huán)狀DNA分子有

 

種．

Answer 1

考點：動物細胞核移植技術,基因工程的原理及技術

專題：

分析：1、X指有RNA生成DNA，表示逆轉(zhuǎn)錄；PCR擴增技術中反體系中應需要引物、TaqDNA聚合酶、模板DNA、緩沖液、脫氧核苷酸、水等，擴增第一輪循環(huán)的模板是Bcl-2 cDNA，需要的酶是cDNA熱穩(wěn)定DNA聚合酶．
2、限制酶能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂．

解答： 解：（1）核移植中，提供細胞核是體細胞，早期胚胎移入受體子宮后繼續(xù)發(fā)育，經(jīng)桑椹胚、囊胚和原腸胚最終發(fā)育為克隆豬．該過程的原理是動物細胞核的全能性．
（2）①X指有RNA生成DNA，表示逆轉(zhuǎn)錄．
②PCR擴增技術中反體系中應需要引物、TaqDNA聚合酶、模板DNA、緩沖液、脫氧核苷酸、水等，需要的酶是cDNA熱穩(wěn)定DNA聚合酶．
（3）根據(jù)圖二粘性末端可知酶M和酶N識別的片段可能是或，由題干已知酶M特異性剪切的DNA片段是，所以酶N特異性剪切的DNA片段是． 將多個片段乙和多個片段丁混合在一起，用DNA連接酶拼接得到環(huán)狀DNA，其中只由兩個DNA片段連接成的環(huán)狀DNA分子有3種情況，分別是乙與丁相連，乙與乙相連，丁與丁相連． 
故答案為：
（1）體   原腸   動物細胞核的全能性
（2）①逆轉(zhuǎn)錄   
②引物   Taq或“熱穩(wěn)定的DNA聚合”或“耐高溫的DNA聚合”
（3）①         
②DNA連接酶        3

點評：本題考查基因工程、動物細胞工程、PCR技術等相關知識，理解限制酶的作用特點是解題的關鍵，同時要求學生具備分析圖形的能力．