Question

12．【加試題】下列文題有關(guān)大腸桿菌的培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，請回答：

（1）配制培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基時(shí)，根據(jù)“細(xì)菌喜葷，霉菌喜素”的規(guī)律，通常在培養(yǎng)基中加入蛋白胨和酵母提取物作為營養(yǎng)物質(zhì)，為維持一定的滲透壓，常需加入一定量的NaCl．
（2）大腸桿菌培養(yǎng)和分離的實(shí)驗(yàn)中，在LB液體培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，培養(yǎng)液經(jīng)稀釋后，在LB固體培養(yǎng)基上進(jìn)行分離，并將培養(yǎng)皿倒置放在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，可以獲得如圖效果． 為了檢測接種、培養(yǎng)過程是否受雜菌污染以及無菌操作是否規(guī)范，應(yīng)同時(shí)將未接種的培養(yǎng)基放入恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)．
（3）通常對獲得的純菌種可以依據(jù)菌落的形狀、大小等特征進(jìn)行初步的鑒定．
（4）關(guān)于“大腸桿菌培養(yǎng)和分離”的操作中，下列敘述正確的是D
A．高壓滅菌加熱結(jié)束時(shí)，打開放氣閥使壓力表指針回到零后，開啟鍋蓋
B．倒平板時(shí)，應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上
C．為了防止污染，接種工具精火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落
D．用記號筆標(biāo)記培養(yǎng)皿中菌落時(shí)，應(yīng)標(biāo)記在皿底上
（5）科學(xué)家利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，利用大腸桿菌生產(chǎn)胰島素，其過程如圖2．由甲和載體乙拼接形成的丙通常稱為重組質(zhì)粒，構(gòu)建得到丙時(shí)必需的工具酶有限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶．在此過程中，用來處理丁以增加細(xì)胞壁通透性的化學(xué)試劑是B
A．氯化鈉    B．氯化鈣     C．次氯酸鈉     D．纖維素酶．

Answer 1

分析 1、無菌操作，包括滅菌和消毒兩種方式，消毒的方法有巴氏消毒法、酒精消毒、煮沸消毒法；滅菌的方法有干熱滅菌、灼燒滅菌和高壓蒸汽滅菌；
2、微生物的接種：微生物接種的方法很多，最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法，常用來統(tǒng)計(jì)樣品活菌數(shù)目的方法是稀釋涂布平板法．
3、平板劃線法：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面．
4、分析圖2：甲是外源DNA分子，乙是質(zhì)粒，丙是重組質(zhì)粒，丁是受體細(xì)胞．

解答 解：（1）配制培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基時(shí)，根據(jù)“細(xì)菌喜葷，霉菌喜素”的規(guī)律，通常在培養(yǎng)基中加入蛋白胨和酵母提取物作為營養(yǎng)物質(zhì)，為維持一定的滲透壓，常需加入一定量的NaCl．
（2）大腸桿菌培養(yǎng)和分離的實(shí)驗(yàn)中，在 LB液體培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，培養(yǎng)液經(jīng)稀釋后，在LB固體培養(yǎng)基上進(jìn)行分離，并將培養(yǎng)皿倒置放在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，可以獲得如圖效果．為了檢測接種、培養(yǎng)過程是否受雜菌污染以及無菌操作是否規(guī)范，應(yīng)同時(shí)將未接種的培養(yǎng)基放入恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)．
（3）通常對獲得的純菌種可以依據(jù)菌落的形狀、大小等特征進(jìn)行初步的鑒定．
（4）A、高壓滅菌加熱結(jié)束，等待壓力表指針回到零后，才能開啟鍋蓋，不能打開放氣閥使壓力表指針回到零，A錯(cuò)誤；
B、倒平板過程中不能打開培養(yǎng)皿的皿蓋，B錯(cuò)誤；
C、接種環(huán)火焰上灼燒后，待冷卻后才可以快速挑取菌落，C錯(cuò)誤；
D、用記號筆標(biāo)記培養(yǎng)皿中菌落時(shí)，應(yīng)標(biāo)記在皿底上，D正確．
故選：D．
（5）由甲和載體乙拼接形成的丙通常稱為重組質(zhì)粒；構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需先用限制酶切割外源DNA分子和運(yùn)載體，其次還需要用DNA連接酶將目的基因與運(yùn)載體連接形成重組DNA分子；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞時(shí)常用感受態(tài)轉(zhuǎn)化法，即用氯化鈣來處理微生物細(xì)胞，以增加細(xì)胞壁通透性，使之成為感受態(tài)細(xì)胞．
故答案為：
（1）酵母提取物NaCl      
（2）LB液體培養(yǎng)基    稀釋   土不分離   倒置    無菌操作是否規(guī)范
（3）菌落     
（4）D
（5）重組質(zhì)粒   限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶      B

點(diǎn)評 本題圖解，考查微生物的分離和培養(yǎng)、基因工程，要求考生識記接種微生物常用的兩種方法；識記培養(yǎng)基的成分、種類及功能；識記基因工程的概念、原理及操作步驟等，能結(jié)合圖中信息準(zhǔn)確答題．