（16分）基因工程是在現(xiàn)代生物學、化學和工程學基礎(chǔ)上建立和發(fā)展起來的，并有賴于微生物學理論和技術(shù)的發(fā)展運用�；�因工程基本操作流程如下圖，

請據(jù)圖分析回答：
（1）圖中A是         ；在基因工程中，需要在               ＿＿＿＿＿酶的作用下才能完成剪接過程。
（2）在上述基因工程的操作過程中，可以遵循堿基互補配對原則的步驟有        。（用圖解中序號表示

（11分）目前基因工程所用的質(zhì)粒載體主要是以天然細菌質(zhì)粒的各種元件為基礎(chǔ)重新組建的人工質(zhì)粒，pBR322質(zhì)粒是較早構(gòu)建的質(zhì)粒載體，其主要結(jié)構(gòu)如圖一所示。

(1)構(gòu)建人工質(zhì)粒時要有抗性基因，以便于________。觀察上圖，如果A為質(zhì)粒，則C表示       。
(2)pBR322分子中有單個EcoRⅠ限制酶作用位點，EcoRⅠ只能識別序列—GAATTC—，并只能在G與A之間切割。若在某目的基因的兩側(cè)各有1個EcoRⅠ的切點，請畫出目的基因兩側(cè)被限制酶EcoRⅠ切割后所形成的黏性末端。
_______________________________________________________________________
(3)pBR322分子中另有單個的BamHⅠ限制酶作用位點，現(xiàn)將經(jīng)BamHⅠ處理后的質(zhì)粒與用另一種限制酶BglⅡ處理得到的目的基因，通過____________作用恢復________________________鍵，成功地獲得了重組質(zhì)粒。能形成重組質(zhì)粒的原因是_______________________________________________________________________
(4) 作為受體大腸桿菌應不含_______________________，以方便篩選已導入重組質(zhì)粒的受體大腸桿菌。將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖二的菌落。再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖三的結(jié)果(空圈表示與圖二對照無菌落的位置)。與圖三空圈相對應的圖二中的菌落表現(xiàn)型是_______，圖三結(jié)果顯示，多數(shù)大腸桿菌導入的是______________。
（5）基因工程中使用的限制酶，其特點是_______________________，下圖四種質(zhì)粒含有E1和E2兩種限制酶的識別，Apr表示抗青霉素的抗性基因，Tcr表示抗四環(huán)素的抗性基因。

將兩端用E1切開的Tcr基因與用E1切開的質(zhì)粒X－1混合連接，連接后獲得的質(zhì)粒類型有＿＿＿。（可多選）

(7分)人體細胞內(nèi)含有抑制癌癥發(fā)生的p53基因，生物技術(shù)可對此基因的變化進行檢測。
（1）檢測基因前要通過PCR進行DNA的擴增。PCR反應體系中含有熱穩(wěn)定DNA聚合酶，下面的表達式不能正確反映DNA聚合酶的功能，這是因為_____________________________________________________________________。                          
（2）下圖表示從正常人和患者體內(nèi)獲取的p53基因的部分區(qū)域。與正常人相比，患者在該區(qū)域的堿基會發(fā)生改變，在上圖中用方框圈出發(fā)生改變的堿基對；這種變異被稱為___________________。


（3）已知限制酶E識別序列為CCGG，若用限制酶E分別完全切割正常人和患者的p53基因部分區(qū)域(見上圖)，那么正常人的會被切成______個片段；而患者的則被切割成長度為______對堿基和______對堿基的兩種片段。
（4）如果某人的p53基因部分區(qū)域經(jīng)限制酶E完全切割后，共出現(xiàn)170、220、290和460堿基對的四種片段，那么該人的基因型是________(以P⁺表示正�；�因，P^-表示異�；�因。

（10分）下圖是胚胎工程技術(shù)研究及應用的相關(guān)情況，其中供體1是良種荷斯坦高產(chǎn)奶牛，供體2是黃牛，請據(jù)圖回答下列問題：

（1）應用1中獲得的小牛，其遺傳物質(zhì)來源于             ，為一次獲得多個細胞B，往往需要向供體2內(nèi)注入的是促性腺激素，而不是性激素，原因是               。
（2）將優(yōu)良公牛的精子收集后放在一定濃度的肝素溶液中進行培養(yǎng)，其目的是                   。
（3）通過應用2獲得小牛，涉及到胚胎工程的最后一道“工序”是           。
（4）應用3中的細胞D取自囊胚的           ，細胞C取自牛胎兒的          。
（5）應用4中獲得二分胚①和②，移植到受體牛中得到兩只小牛，兩只小牛的性別是     。
（6）如果體外受精后，在精核與卵核融合之前，用微型吸管除雄核，再用細胞松弛素B處理（作用類似于用秋水仙素處理植物細胞），處理后的受精卵可發(fā)育成小鼠。這種方法在動物新品種選育中的顯著優(yōu)點是                    。
（7）如果將外源基因?qū)�入牛受精卵，則外源基因可能隨機插入到牛受精卵DNA中。這種受精卵有的可發(fā)育成轉(zhuǎn)基因牛，有的卻死亡。請分析因外源基因插入導致受精卵死亡的最可能原因                                               （2分）

（11分）回答有關(guān)“試管嬰兒”的問題：
(1) “試管嬰兒”在生物學上所依據(jù)的原理是        

（6分）Ⅰ．血糖濃度是人體健康狀況的重要指標之一，多種激素參與血糖濃度的調(diào)節(jié)。
（1）血糖濃度的正常范圍是          mg/dL。胰島素分泌不足引起的糖尿
病患者由于         發(fā)生障礙，體內(nèi)脂肪和蛋白質(zhì)分解加強，導致機
體消瘦。血糖含量過低導致驚厥和昏迷時，應及時給患者靜脈輸入   
          以緩解癥狀。
（2）下圖中，三條曲線分別表示進食后血液中胰島素和胰高血糖素相對含量的變化。其中表示糖尿病患者胰島素變化趨勢的是曲線     ，表示健康人胰高血糖素變化趨勢的是曲線       。

（3）體檢時，測量血糖應在空腹時進行，其生理學理由是排除進食后                  的干擾。
Ⅱ．（8分）螢火蟲能發(fā)光是因為螢火蟲體內(nèi)通過熒光素酶催化的系列反應所產(chǎn)生的現(xiàn)象。如果熒光素酶存在于植物體內(nèi)，也可使植物體發(fā)光。一直以來，熒光素酶的唯一來源是從螢火蟲腹部提取。但加利福尼亞大學的一組科學家成功地通過轉(zhuǎn)基因工程將熒光素酶基因?qū)�入到大腸桿菌體內(nèi)，并在大腸桿菌體內(nèi)生產(chǎn)熒光素酶。請你根據(jù)已有的知識回答下列有關(guān)問題：
（1）在此轉(zhuǎn)基因工程中，目的基因是                ，提取目的基因的途徑通常有兩條，提取該目的基因的途徑最可能是                    。
（2）將此目的基因?qū)�入到大腸桿菌體內(nèi)需要運載體的幫助。下列選項是選取運載體的時候必須考慮的有                。
A．能夠在宿主細胞內(nèi)復制并穩(wěn)定保存                B．具有特定的限制酶切點
C．具有與目的基因相同的堿基片斷                  D．具有某些標記基因
（3）下列可作為受體細胞的生物有          。
A．土壤農(nóng)桿菌         B．結(jié)核桿菌        C．噬菌體          D．枯草桿菌
（4）在此轉(zhuǎn)基因工程中，常用質(zhì)粒作為運載體；在將體外重組DNA導入大腸桿菌體內(nèi)之前通常要用           處理大腸桿菌，目的是                      ，使重組基因能夠?qū)�入受體細胞。（5）由于熒光素酶的特殊作用，人們一直設(shè)想將其基因作為實驗工具，將它和某一基因連接在一起，通過植物是否發(fā)光來確定該基因是否已經(jīng)轉(zhuǎn)入到植物體內(nèi)，如判斷固氮基因是否成功導入某植物體內(nèi)。正常根瘤菌體內(nèi)的固氮基因與螢火蟲體內(nèi)的熒光素酶基因相比，除了堿基對的順序、數(shù)目不同以外，在結(jié)構(gòu)方面還存在不同點，主要不同是                                ，而熒光素酶基因的編碼區(qū)是間隔、不連續(xù)的。
（6）與雜交育種、誘變育種相比，通過基因工程來培育新品種的主要優(yōu)點是                  
                                                                。

（7分）絮凝性細菌分泌的具有絮凝活性的高分子化合物，能與石油污水中的懸浮顆粒和有機物等形成絮狀沉淀，起到凈化污水的作用。為進一步提高對石油污水的凈化效果，將絮凝性細菌和石油降解菌融合，構(gòu)建目的菌株。其流程圖如下。

據(jù)圖回答：
（1）溶菌酶的作用是                               。
（2）PEG的作用是                                。
（3）經(jīng)處理后，在再生培養(yǎng)基上，未融合的A、B難以生長。圖中AB融合菌能生長和繁殖的原因是                                                             。
（4）目的菌株的篩選：篩選既能分泌具有絮凝活性的化合物，又能在含有                 的培養(yǎng)基上生長的AB融合菌，選擇效果最好的最為目的菌株。
（5）為探究目的菌株不同發(fā)酵時間發(fā)酵液的絮凝效果，將目的菌株進行發(fā)酵培養(yǎng)，定時取發(fā)酵液，加入石油污水中：同時設(shè)置                              為對照組。經(jīng)攪拌、靜置各3分鐘后，分別測定上層水樣的石油濃度COD值（COD值越高表示有機物污染程度越高）,計算石油去除率和COD去除率，結(jié)果如下圖。

（6）目的菌的種群增長曲線是                           型。在40～44小時，發(fā)酵液對石油污水的凈化效果最好，其原因是                                                       。

（8分）番茄營養(yǎng)豐富，是人們喜愛的一類果蔬。但普通番茄細胞中含有多聚半乳糖醛酸酶基因，控制細胞產(chǎn)生多聚半乳糖醛酸酶，該酶能破壞細胞壁，使番茄軟化，不耐貯藏。為滿足人們的生產(chǎn)生活需要，科學家們通過基因工程技術(shù)，培育出了抗軟化、保鮮時間長的

番茄新品種。操作流程如圖，請回答：
(1)在番茄新品種的培育過程中，將目的基因?qū)�入受體細胞的方法最可能叫做           
(2)從圖中可見，mRNAl和mRNA2的結(jié)合直接導致了           無法合成，最終使番茄獲得了抗軟化的性狀。
(3)普通番茄細胞導入目的基因后，經(jīng)③過程形成              ，然后誘導出試管苗，進一步培養(yǎng)成正常植株。

（11分）.香蕉原產(chǎn)熱帶地區(qū)，是我國南方重要的經(jīng)濟作物之一。廣東省冬季常受強寒潮和霜凍影響，對香蕉生長發(fā)育影響很大。由香蕉束頂病毒（BBTV，單鏈環(huán)狀DNA病毒）
引起的香蕉束頂病，對香蕉生產(chǎn)的危害十分嚴重。當前香蕉栽培品種多為三倍體，由于無性繁殖是香蕉繁育的主要方式，缺少遺傳變異性，因此利用基因工程等現(xiàn)代科技手段提高其種質(zhì)水平，具有重要意義。請根據(jù)上述材料，回答下列問題：
（1)簡述香蕉大規(guī)�？焖俜敝臣夹g(shù)的過程。
（2）脫毒香蕉苗的獲得，可采用                 的方法，此方法的依據(jù)是                 
和                                             。
(3）建立可靠的BBTV檢測方法可以監(jiān)控脫毒香蕉苗的質(zhì)量，請問可用哪些方法
檢測病毒的存在？（列舉兩種方法）
(4)在運用轉(zhuǎn)基因香蕉的過程中，在生態(tài)安全方面可能會出現(xiàn)什么問題？（列舉兩點）
（5)抑制果膠裂解酶的活性可以延長香蕉果實儲藏期，請描述采用蛋白質(zhì)工程技術(shù)降低該酶活性的一般過程。

（11分）．自然情況下，牛的生育率很低，通過現(xiàn)代科技手段，可以實現(xiàn)良種牛的快速繁殖。請按照提示，回答下列問題：
(1)現(xiàn)有一頭良種雄性黃牛，請你提供一種簡便的方法，使這頭公牛在一年內(nèi)繁殖數(shù)千頭自己的后代。
(2)現(xiàn)有一頭良種雌性黃牛，采用胚胎移植的方法，可使這頭良種牛一年生下數(shù)十頭自己的后代。下圖為牛胚胎移植的基本程序，請據(jù)圖回答：

①圖中a、b、c過程分別是指 ____________、________________、 __________。
②在胚胎移植過程中，供、受體母牛選擇好后，要用________激素進行同期發(fā)情處理,這樣處理的原因是 ：                                                    
                                                                       。
③為了提高牛胚胎的利用率，常采取的方法是               ；處理的時期是            。
④從哺乳動物早期胚胎或原始性腺中分離出來的細胞，稱為ES或EK細胞。這類細胞的形態(tài)特征有                                      。
⑤科學家們正試圖利用此類細胞來進行動物克隆或人體器官的克隆，以解決醫(yī)療難題。請問：以干細胞為克隆材料優(yōu)于一般體細胞的理由是，干細胞具有較高的           。新生嬰兒臍血中含有大量的造血干細胞，從免疫學角度分析，臍血自身移植的優(yōu)點有                        。