Question

9．降鈣素是一種多肽類激素，臨床上用于治療骨質(zhì)疏松癥等．人的降鈣素活性很低，半衰期較短．某科研機構(gòu)為了研發(fā)一種活性高、半衰期長的新型降鈣素，從預(yù)期新型降鈣素的功能出發(fā)，推測相應(yīng)的脫氧核苷酸序列，并人工合成了兩條72個堿基的DNA單鏈，兩條鏈通過18個堿基對形成部分雙鏈DNA片段，再利用Klenow酶補平，獲得雙鏈DNA，過程如圖．
在此過程中發(fā)現(xiàn)，合成較長的核苷酸單鏈易產(chǎn)生缺失堿基的現(xiàn)象．分析回答下列問題：
（1）Klenow酶是一種DNA聚合酶，合成的雙鏈DNA有126個堿基對．
（2）獲得的雙鏈DNA經(jīng)EcoRⅠ（識別序列和切割位點-G↓AATTC-）和BamHⅠ（識別序列和切割位點-G↓GATCC-）雙酶切后插入到大腸桿菌質(zhì)粒中，篩選含重組質(zhì)粒的大腸桿菌并進行DNA測序驗證．
①大腸桿菌是理想的受體細胞，這是因為它繁殖快、單細胞、遺傳物質(zhì)相對較少，將目的基因?qū)�入此種受體細胞，需將其處理成感受態(tài)（狀態(tài)）．
②設(shè)計EcoRⅠ和BamHⅠ雙酶切的目的是保證目的基因和載體的定向連接（或防止目的基因和載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接）
③要進行重組質(zhì)粒的鑒定和選擇，需要大腸桿菌質(zhì)粒中含標記基因．
（3）經(jīng)DNA測序表明，最初獲得的多個重組質(zhì)粒，均未發(fā)現(xiàn)完全正確的基因序列，最可能的原因是合成的核苷酸單鏈仍較長，產(chǎn)生缺失堿基的現(xiàn)象．
（4）上述制備該新型降鈣素，運用的現(xiàn)代生物工程技術(shù)是蛋白質(zhì)工程．

Answer 1

分析 分析題圖：圖示是從預(yù)期新型降鈣素的功能出發(fā)，推測相應(yīng)的脫氧核苷酸序列，并人工合成了兩條72個堿基的DNA單鏈，兩條鏈通過18個堿基對形成部分雙鏈DNA片段，再利用Klenow酶補平，獲得雙鏈DNA．同時，在此過程中發(fā)現(xiàn)，合成較長的核苷酸單鏈易產(chǎn)生缺失堿基的現(xiàn)象．

解答 解：（1）圖示過程是以DNA一條鏈為模板，利用4種游離的脫氧核糖核苷酸為原料來合成雙鏈DNA，此過程所用的酶是DNA聚合酶．合成的雙鏈DNA含有的堿基對有（72-18）×2+18=126個堿基對．
（2）①大腸桿菌繁殖快、單細胞、遺傳物質(zhì)相對較少，因此它是基因工程理想的受體細胞．將目的基因?qū)�入微生物細胞常用感受態(tài)轉(zhuǎn)化法，即用鈣離子處理微生物細胞，使之成為易于吸收周圍環(huán)化中DNA分子的感受態(tài)．
②限制酶具有特異性，一種限制酶只識別一定的脫氧核苷酸序列，切割特定的位點．為了防止目的基因和載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接或保證目的基因和載體定向連接，將獲得的雙鏈DNA用EcoRI和BamHI進行雙酶切．
③重組質(zhì)粒中含有標記基因，標記基因可以鑒別受體細胞中是否含有目的基因．
（3）由圖可知，在合成DNA雙鏈時，如果合成的核苷酸單鏈較長，容易發(fā)生缺失堿基的現(xiàn)象，這樣可能會引起最初獲得的多個重組質(zhì)粒均未發(fā)現(xiàn)完全正確的基因序列．
（4）制備該新型降鈣素時，先從預(yù)期新型降鈣素的功能出發(fā)，推測相應(yīng)的脫氧核苷酸序列，之后改造DNA分子，最后生成新型降鈣素，這是蛋白質(zhì)工程的具體過程．
故答案為：
（1）DNA聚合　126
（2）①繁殖快、單細胞、遺傳物質(zhì)相對較少　  感受態(tài)
②保證目的基因和載體的定向連接（或防止目的基因和載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接）
③標記基因
（3）合成的核苷酸單鏈仍較長，產(chǎn)生缺失堿基的現(xiàn)象
（4）蛋白質(zhì)工程

點評 本題結(jié)合圖解，考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的概念、原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)，能結(jié)合圖中信息準確答題．