Question

5．根據(jù)基因工程的有關(guān)知識(shí)，回答下列問題：
（1）限制性內(nèi)切酶主要來源于原核生物，切割DNA分子后產(chǎn)生的片段，其末端類型有黏性末端和平末端．
（2）按其來源不同，基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類，即E•coliDNA連接酶和T₄DNA連接酶
（3）反轉(zhuǎn)錄作用的模板是mRNA，若要在體外獲得大量反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，常采用PCR技術(shù)，該技術(shù)所需要的條件有模板DNA、引物、Taq酶（熱穩(wěn)定DNA聚合酶）、原料和能量等．
（4）基因工程中除質(zhì)粒外，λ噬菌體的衍生物和動(dòng)植物病毒也可作為運(yùn)載體．
（5）若用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細(xì)胞，而是應(yīng)該用Ca²⁺進(jìn)行處理．

Answer 1

分析 基因工程至少需要三種工具：限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）、DNA連接酶、運(yùn)載體．限制酶能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂，形成黏性末端和平末端兩種．DNA連接酶分為兩類：E．coliDNA連接酶和T₄DNA連接酶．基因工程常用的運(yùn)載體：質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒．

解答 解：（1）限制性內(nèi)切酶主要來源于原核生物，限制性核酸內(nèi)切酶可以將DNA分子切成兩種類型的末端，平末端和黏性末端．
（2）DNA連接酶分為兩類：E．coliDNA連接酶和T₄DNA連接酶．這二者都能連接黏性末端，此外T₄DNA連接酶還可以連接平末端，但連接平末端時(shí)的效率比較低
（3）反轉(zhuǎn)錄是以mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄先合成單鏈DNA，再合成雙鏈DNA，利用PCR技術(shù)進(jìn)行大量擴(kuò)增．該技術(shù)所需要的條件有模板DNA、引物、Taq酶（熱穩(wěn)定DNA聚合酶）、原料和能量等．
（4）基因工程中除質(zhì)粒外，動(dòng)植物病毒和λ噬菌體的衍生物也可作為運(yùn)載體．
（5）當(dāng)受體細(xì)胞是細(xì)菌時(shí)，為了增大導(dǎo)入的成功率，常用Ca²⁺處理，得到感受態(tài)細(xì)胞，此時(shí)細(xì)胞壁和細(xì)胞膜的通透性增大，容易吸收重組質(zhì)粒．未處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒（外源DNA）的能力極弱．
故答案為：
（1）原核   黏性末端和平末端  
 （2）E•coliDNA連接酶和T₄DNA連接酶
（3）mRNA     PCR    Taq酶（熱穩(wěn)定DNA聚合酶） 
（4）λ噬菌體的衍生物    
（5）Ca²⁺

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，重點(diǎn)考查基因工程的工具，只要考生識(shí)記基因工程三種工具的相關(guān)知識(shí)即可，屬于考綱識(shí)記層次的考查，這需要考生在平行的學(xué)習(xí)過程中構(gòu)建相關(guān)知識(shí)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)．