Question

8．某動(dòng)物能產(chǎn)生的一種有高利用價(jià)值的蛋白質(zhì)，但產(chǎn)量較低．研究人員利用基因工程等技術(shù)，將該蛋白質(zhì)的基因?qū)�入某雙子葉植物體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)該基因在根部有較高的表達(dá)效應(yīng)．
請回答下列相關(guān)問題：
（1）研究人員以動(dòng)物體內(nèi)該蛋白質(zhì)的mRNA為模板，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的cDNA作為目的基因．在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，在目的基因首端一定要有啟動(dòng)子序列，尾端要有終止子 序列，才能使目的基因正常轉(zhuǎn)錄．
（2）將目的基因?qū)�入該植物�?xì)胞，可用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，該方法能使Ti質(zhì)粒上的T-DNA將目的基因插入到植物細(xì)胞的染色體上．
（3）若要檢測該目的基因在植物體內(nèi)的表達(dá)最終產(chǎn)物，應(yīng)該取植物的根部細(xì)胞，提取蛋白質(zhì)，利用抗原-抗體雜交技術(shù)進(jìn)行檢測，如果出現(xiàn)雜交帶，則表明目的基因成功表達(dá)．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
1、目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
3、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
4、目的基因的檢測與鑒定：（1）分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．（2）個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）目的基因的獲取可通過反轉(zhuǎn)錄法，即以蛋白質(zhì)的mRNA為模板，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的cDNA作為目的基因．基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心內(nèi)容，一個(gè)表達(dá)載體的組成，除了目的基因外，還有啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等，因此在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，在目的基因首端一定要有啟動(dòng)子序列，尾端要有終止子序列，才能使目的基因正常轉(zhuǎn)錄．
（2）將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞，常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，先要將目的基因插入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的T-DNA中，然后用該農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞，通過DNA重組將目的基因插入植物細(xì)胞的染色體上．
（3）檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)常用抗原-抗體雜交技術(shù)．若要檢測該目的基因在植物體內(nèi)的表達(dá)最終產(chǎn)物，應(yīng)該取植物的根部細(xì)胞，提取蛋白質(zhì)，利用抗原-抗體雜交技術(shù)進(jìn)行檢測，如果出現(xiàn)雜交帶，則表明目的基因成功表達(dá)．
故答案為：
（1）cDNA    啟動(dòng)子    終止子
（2）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化    T-DNA
（3）根部    抗原-抗體雜交    雜交帶

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟的相關(guān)細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題，屬于考綱識(shí)記和理解層次的考查．