Question

33、酶切圖譜是描述限制性內(nèi)切酶的酶切點(diǎn)的位置和距離信息的圖譜，通常選取某一特定長(zhǎng)度的DNA分子，用多種限制酶單獨(dú)或聯(lián)合切割．再通過電泳技術(shù)將酶切片段進(jìn)行分離，計(jì)算相對(duì)大小，從而確定每一種限制酶在DNA分子中的切點(diǎn)位置和相對(duì)距離．下圖表示BamHⅠ、BstⅠ、BglⅡ三種限制酶識(shí)別的核苷酸序列和切割位點(diǎn)，表格中數(shù)據(jù)是用限制酶EcoRV、MboⅠ單獨(dú)或聯(lián)合切割同一種質(zhì)粒，得到DNA片段長(zhǎng)度．請(qǐng)回答下列問題：

（1）限制性內(nèi)切酶BamHⅠ與BstⅠ作用的特點(diǎn)是

 

，BamHI與BglⅡ作用的特點(diǎn)是

 

．黏性末端重組的DNA分子

 

 （能/不能）被BglⅡ識(shí)別．
（2）請(qǐng)?jiān)诖痤}卡的指定位置畫出質(zhì)粒上EcoRV、MboⅠ的切割位點(diǎn)．
（3）DNA連接酶與DNA聚合酶作用的共同點(diǎn)都形成是

 

鍵，不同點(diǎn)是

 

．
（4）在基因工程中，檢測(cè)受體細(xì)胞是否含有目的基因采用的方法是

 

．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：1、限制酶具有特異性，即能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂．
2、DNA連接酶和DNA聚合酶的區(qū)別：
①DNA連接酶是在兩個(gè)DNA片段之間形成磷酸二酯鍵，而DNA聚合酶只能將單個(gè)脫氧核苷酸加到已有的核苷酸片段上，形成磷酸二酯鍵；
②DNA連接酶是同時(shí)連接雙鏈的切口，而DNA聚合酶只是在單鏈上將一個(gè)個(gè)脫氧核苷酸連接起來(lái)；
③DNA連接酶不需要模板，而DNA聚合酶需要模板

解答： 解：（1）限制酶BamHⅠ與BstⅠ能識(shí)別相同的核苷酸序列，而且切點(diǎn)相同；BamHI與BglⅡ識(shí)別的核苷酸序列不同，但能產(chǎn)生相同的黏性末端作．黏性末端重組的DNA序列為GGATCT∥CCTAGG，而限制酶BglⅡ的識(shí)別序列為AGATCT∥TCTAGA，根據(jù)酶的專一性原理可知，重組DNA分子不能被BglⅡ識(shí)別．
（2）用限制酶EcoRV單獨(dú)切割時(shí)，只能形成一種長(zhǎng)度的DNA片段，說(shuō)明該質(zhì)粒上只有一個(gè)EcoRV酶切位點(diǎn)；用限制酶MboⅠ單獨(dú)切割時(shí)，能形成兩種長(zhǎng)度的DNA片段，說(shuō)明該質(zhì)粒上有2個(gè)MboⅠ酶切位點(diǎn)；用限制酶EcoRV、MboⅠ同時(shí)切割時(shí)，能形成三種長(zhǎng)度的DNA片段，且其中11.5kb的DNA片段被切割成兩段，說(shuō)明該片段上有一個(gè)EcoRV酶切位點(diǎn)，因此質(zhì)粒上EcoRV、MboⅠ的切割位點(diǎn)如圖所示：

（3）DNA連接酶與DNA聚合酶作用的共同點(diǎn)都形成是磷酸二酯鍵，不同點(diǎn)是DNA連接酶連接DNA片段之間的磷酸二酯鍵，DNA聚合酶連接DNA片段與單個(gè)脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵．
（4）檢測(cè)受體細(xì)胞是否含有目的基因常用DNA分子雜交技術(shù)．
故答案為：
（1）識(shí)別相同的核苷酸序列，而且切點(diǎn)相同     識(shí)別的核苷酸序列不同，產(chǎn)生相同的黏性末端    不能
（2）

（3）磷酸二酯    DNA連接酶連接DNA片段之間的磷酸二酯鍵，DNA聚合酶連接DNA片段與單個(gè)脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵
（4）DNA分子雜交技術(shù)

點(diǎn)評(píng)：本題結(jié)合圖表，考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程需要的三種工具及其作用，掌握基因工程的具體操作步驟，能根據(jù)圖表中信息準(zhǔn)確答題，屬于考綱識(shí)記和理解層次的考查．