Question

人們發(fā)現(xiàn)小型豬的器官可以用來(lái)代替人體的器官進(jìn)行移植，但是小型豬的器官表面的抗原可以起免疫排斥反應(yīng)，如圖為科學(xué)家將小型豬器官的表面抗原基因（Anti）進(jìn)行“反向處理”，從而獲得reAnti基因，將其轉(zhuǎn)入豬的成纖維細(xì)胞，培育成轉(zhuǎn)基因克隆豬的過(guò)程示意圖，其根據(jù)圖回答問(wèn)題：
（1）過(guò)程1中，在獲得目的基因的過(guò)程中，PCR技術(shù)相當(dāng)重要，PCR擴(kuò)增時(shí)，需要在一定的緩沖溶液中加入DNA模板、分別與兩條模板結(jié)合的

 

、四種脫氧核苷酸和

 

．若使reAnti基因和Anti基因在轉(zhuǎn)基因的克隆豬的同一個(gè)細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，應(yīng)在人工合成的reAnti基因的首段連接上

 

，其作用是能夠被RNA聚合酶識(shí)別并結(jié)合從而啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄過(guò)程．
（2）過(guò)程3將重組質(zhì)粒導(dǎo)入到豬胎成纖維細(xì)胞后，要通過(guò)

 

技術(shù)檢測(cè)reAnti基因是否已經(jīng)重組到豬胎成纖維細(xì)胞的

 

上，從而使目的基因的遺傳特性得以穩(wěn)定維持和表達(dá)．
（3）從豬胎中取成纖維細(xì)胞，用胰蛋白酶處理，然后分散培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)瓶應(yīng)置于含

 

的混合氣體培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)．
（4）器官移植，基因治療也可涉及EK細(xì)胞，該細(xì)胞來(lái)源于

 

或原始性腺．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù),動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)過(guò)程,胚胎干細(xì)胞的來(lái)源及分化

專題：

分析：結(jié)合題意分析圖解：圖中①為目的基因的獲取、②為基因表達(dá)載體的構(gòu)建、③為目的基因?qū)�入受體細(xì)胞、④將卵母細(xì)胞中細(xì)胞核移除、⑤為構(gòu)建重組細(xì)胞、⑥為早期胚胎培養(yǎng)、⑦為胚胎移植、⑧為轉(zhuǎn)基因克隆豬的出生．

解答： 解：（1）PCR擴(kuò)增時(shí)，需要在一定的緩沖溶液中加入DNA模板、分別與兩條模板結(jié)合的引物、四種脫氧核苷酸和Taq 酶/耐高熱DNA聚合酶．啟動(dòng)子是RNA聚合酶特異性識(shí)別和結(jié)合的DNA序列，是基因的一個(gè)組成部分，控制基因表達(dá)（轉(zhuǎn)錄）的起始時(shí)間和表達(dá)的程度．因此若使reAnti基因和Anti基因在轉(zhuǎn)基因的克隆豬的同一個(gè)細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，應(yīng)在人工合成的reAnti基因的首段連接上啟動(dòng)子．
（2）圖中進(jìn)行了細(xì)胞核移植，因此可以確定目的基因?qū)�入到成纖維細(xì)胞的細(xì)胞核中的染色體上，因此在在檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入時(shí)，應(yīng)通過(guò)DNA分子雜交技術(shù)技術(shù)檢測(cè)reAnti基因是否已經(jīng)重組到豬胎成纖維細(xì)胞的染色體上，從而使目的基因的遺傳特性得以穩(wěn)定維持和表達(dá)．
（3）在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中，用胰蛋白酶處理，然后分散培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)瓶應(yīng)置于含95%的空氣和5%的CO₂混合氣體的混合氣體培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，其中的二氧化碳可以維持培養(yǎng)液的PH．
（4）胚胎干細(xì)胞來(lái)源于早期胚胎或原始性腺．
故答案為：
（1）引物    Taq 酶/耐高熱DNA聚合酶    啟動(dòng)子
（2）DNA分子雜交技術(shù)     染色體
（3）95%的空氣和5%的CO₂混合氣體   
（4）早期胚胎

點(diǎn)評(píng)：本題難度適中，屬于考綱中識(shí)記、理解層次的要求，考查了基因工程中的PCR技術(shù)、目的基因的檢測(cè)、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)及胚胎干細(xì)胞等方面的知識(shí)，要求考生能讀懂圖示流程以及識(shí)記相關(guān)基礎(chǔ)知識(shí)．