Question

人體內的P53基因是正常細胞內重要的抑癌基因，研究表明P53基因突變可導致肝臟細胞癌變．科學家發(fā)現P53基因對體外培養(yǎng)的肝癌細胞生長有抑制作用，擬通過實驗加以驗證．根據相關信息回答下列問題：
（1）培養(yǎng)肝癌細胞：切下新鮮的肝癌組織，在37℃下用

 

酶消化30～40分鐘，再置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)．細胞培養(yǎng)過程中，必需滿足培養(yǎng)箱中的氣體環(huán)境外，還需要滿足的條件有

 

（需要正確寫出三種以上）．
（2）體外大量擴增P53基因：該技術中需要加入

 

種引物和一種特殊的

 

酶．
（3）將P53基因經過一系列的處理并與脂質體混合，再將混合物滴加至肝癌細胞上，輕輕混勻．最后篩選出含有P53基因的肝癌細胞，脂質體在這個操作中的作用是

 

．
（4）將兩種細胞接入孔空板中，從次日開始檢測每孔的細胞總數，繪制成如圖所示的增長曲線．曲線表示1的是

 

細胞，曲線表示2的是

 

細胞．

Answer 1

考點：動物細胞與組織培養(yǎng)過程,基因工程的應用

專題：

分析：1、分析曲線圖：P53基因是正常細胞內重要的抑癌基因，所以導入P53基因的肝癌細胞數目會下降，即曲線2，而普通肝癌細胞能無限增殖，其數目不斷上升，即曲線1．
2、PCR擴增反應需要兩種引物、模板DNA、原料（4種脫氧核苷酸）、酶（耐高溫的DNA聚合酶）．
3、動物細胞培養(yǎng)需要滿足以下條件
①無菌、無毒的環(huán)境：培養(yǎng)液應進行無菌處理．通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素，以防培養(yǎng)過程中的污染．此外，應定期更換培養(yǎng)液，防止代謝產物積累對細胞自身造成危害．
②營養(yǎng)：合成培養(yǎng)基成分：糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等．通常需加入血清、血漿等天然成分．
③溫度：適宜溫度：哺乳動物多是36.5℃+0.5℃；pH：7.2～7.4．
④氣體環(huán)境：95%空氣+5%CO₂．O₂是細胞代謝所必需的，CO₂的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH．

解答： 解：（1）動物細胞培養(yǎng)前需要用胰蛋白酶處理組織，使細胞分散成單個細胞．動物細胞培養(yǎng)的條件：①無菌、無毒的環(huán)境：消毒、滅菌；添加一定量的抗生素；定期更換培養(yǎng)液，以清除代謝廢物．②營養(yǎng)物質：糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質．③溫度和PH．④一定的氣體環(huán)境：95%空氣（細胞代謝必需的）和5%的CO₂（維持培養(yǎng)液的PH）．
（2）體外大量擴增P53基因：該技術中需要加入2種引物和一種特殊的熱穩(wěn)定DNA聚合（或耐熱的DNA聚合）酶．
（3）脂質體在這個操作中的作用是將P53（目的）基因導入肝癌細胞．
（4）P53基因是正常細胞內重要的抑癌基因，所導入P53基因的肝癌細胞數目下降，而普通肝癌細胞能無限增殖，其數目不斷上升，即曲線1是肝癌細胞，曲線2是轉入P53基因的肝癌細胞．
故答案為：
（1）胰蛋白酶       無菌無毒的環(huán)境、適宜營養(yǎng)、適宜的溫度和pH 
（2）2             熱穩(wěn)定DNA聚合（或耐熱的DNA聚合）
（3）將P53（目的）基因導入肝癌細胞    
（4）肝癌細胞      轉入P53基因的肝癌細胞

點評：本題考查動物細胞培養(yǎng)和應用、探究實驗，意在考查考生的識記能力和理解所學知識要點，把握知識間內在聯系的能力；能運用所學知識，解決問題的能力；具有對一些生物學問題進行初步探究的能力，并能對實驗現象和結果進行解釋、分析和處理．