13．pBV220載體是我國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒研究所自行構(gòu)建并廣泛應(yīng)用的大腸桿菌溫控載體，大小為3666bp（bp表示堿基對(duì)），其結(jié)構(gòu)如下圖所示．圖中PRPL是啟動(dòng)子，rrnB是基因轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)，Ampr是氨芐抗性基因，ori是質(zhì)粒復(fù)制起點(diǎn)，EcoRⅠ、HindⅢ等為各種限制性內(nèi)切酶．請(qǐng)據(jù)圖回答下列有關(guān)問題：
（1）從圖中可看出，pBV220作為運(yùn)載體具備的條件有多個(gè)限制性內(nèi)切酶的切割位點(diǎn)、標(biāo)記基因．
（2）該質(zhì)粒可被A、B、C三種限制性內(nèi)切酶同時(shí)切割．單獨(dú)A切割得一條長(zhǎng)鏈，單獨(dú)B切也得一條長(zhǎng)鏈，A和C同時(shí)切割得2個(gè)500bp和1個(gè)2666bp片段，B和C同時(shí)切割得2個(gè)250bp和1個(gè)3166bp片段．若以A的切割位點(diǎn)為計(jì)算起點(diǎn)，則B的切割位點(diǎn)與A點(diǎn)最短長(zhǎng)度為750bp，C的兩個(gè)切割位點(diǎn)與A點(diǎn)的最距離分別為500bp、1000bp．
（3）PR和PL都是啟動(dòng)子，pBV220載體構(gòu)建過程中把兩個(gè)啟動(dòng)子串聯(lián)在一起，形成了雙啟動(dòng)子，雙啟動(dòng)子的作用可能是保證目的基因的高水平表達(dá)（高效轉(zhuǎn)錄）．溫控基因CIts857編碼對(duì)溫度敏感的CIts蛋白，CIts在30℃時(shí)具有抑制啟動(dòng)子的活性，在42℃時(shí)失活．促進(jìn)工程菌目的基因表達(dá)的誘導(dǎo)溫度為42℃．

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
1、目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕蛭膸�(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
3、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
4、目的基因的檢測(cè)與鑒定：（1）分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．（2）個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）從圖中可看出，pBV220作為運(yùn)載體具備的條件有具有多個(gè)限制性內(nèi)切酶的切割位點(diǎn)（便于目的基因的插入）、標(biāo)記基因（便于鑒定和篩選含有目的基因的受體細(xì)胞）．
（2）單獨(dú)A切割得一條長(zhǎng)鏈，單獨(dú)B切也得一條長(zhǎng)鏈，A和C同時(shí)切割得2個(gè)500bp和1個(gè)2666bp片段，B和C同時(shí)切割得2個(gè)250bp和1個(gè)3166bp片段，這說明該質(zhì)粒上有一個(gè)A酶切割位點(diǎn)、一個(gè)B酶切割位點(diǎn)、2個(gè)C酶切割位點(diǎn)．A和C同時(shí)切割得2個(gè)500bp和1個(gè)2666bp片段，說明A和C酶的一個(gè)切點(diǎn)之間的長(zhǎng)度為500bp，B和C同時(shí)切割得2個(gè)250bp和1個(gè)3166bp片段，說明B和C酶的一個(gè)切點(diǎn)之間的長(zhǎng)度為250bp，若以A的切割位點(diǎn)為計(jì)算起點(diǎn)，則B的切割位點(diǎn)與A點(diǎn)最短長(zhǎng)度為500+250=750bp，C的兩個(gè)切割位點(diǎn)與A點(diǎn)的最距離分別為500bp、1000bp．
（3）PR和PL都是啟動(dòng)子，pBV220載體構(gòu)建過程中把兩個(gè)啟動(dòng)子串聯(lián)在一起，形成了雙啟動(dòng)子，雙啟動(dòng)子的作用可能是保證目的基因的高水平表達(dá)（高效轉(zhuǎn)錄）．溫控基因CIts857編碼對(duì)溫度敏感的CIts蛋白，CIts在30℃時(shí)具有抑制啟動(dòng)子的活性，在42℃時(shí)失活，因此要促進(jìn)工程菌目的基因表達(dá)就要使CIts蛋白失活，即促進(jìn)工程菌目的基因表達(dá)的誘導(dǎo)溫度為42℃．
故答案為：
（1）多個(gè)限制性內(nèi)切酶的切割位點(diǎn)      標(biāo)記基因
（2）750bp     500bp     1000bp
（3）保證目的基因的高水平表達(dá)（高效轉(zhuǎn)錄）     42℃

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合圖解，考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、操作步驟及相關(guān)細(xì)節(jié)，能結(jié)合圖中信息準(zhǔn)確答題，屬于考綱識(shí)記和理解層次的考查．

練習(xí)冊(cè)系列答案
相關(guān)習(xí)題

科目：高中生物 來(lái)源： 題型：解答題

3．某校生物興趣小組利用分布廣泛的黑藻為實(shí)驗(yàn)材料，研究環(huán)境因素對(duì)光合作用強(qiáng)度的影響進(jìn)行改進(jìn)，圖1是根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)繪制的曲線，圖2為黑藻葉綠體結(jié)構(gòu)和功能示意圖．請(qǐng)分析回答問題：

興趣小組將黑藻浸在加有適宜培養(yǎng)液的大試管中（室溫20℃），以白熾燈為光源，通過移動(dòng)白熾燈，改變光源與大試管間的距離，觀測(cè)黑藻放出氣泡的情況，結(jié)果如圖1中曲線x所示．
（1）該實(shí)驗(yàn)研究的是光照強(qiáng)度對(duì)光合速率的影響，用單位時(shí)間內(nèi)氧氣（氣泡）的釋放量作為光合速率的檢測(cè)指標(biāo)．
（2）若將燈的距離固定在20cm，溫度適宜，光照較長(zhǎng)時(shí)間后發(fā)現(xiàn)試管中的黑藻在單位時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生的氣泡數(shù)逐漸減少，產(chǎn)生這一現(xiàn)象的原因是隨著光合作用的進(jìn)行二氧化碳越來(lái)越少．
（3）該小組在室溫、10℃和30℃時(shí)分別進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如圖1，D點(diǎn)的限制因素是溫度．
（4）研究者分離黑藻葉綠體（圖2）適宜條件培養(yǎng)，由結(jié)構(gòu)①轉(zhuǎn)移至結(jié)構(gòu)②物質(zhì)主要是ATP和[H]．
（5）當(dāng)光源與大試管間的距離由45cm逐漸改變?yōu)?0cm的過程中，圖2中反應(yīng)Ⅱ中的兩個(gè)化學(xué)反應(yīng)過程變慢的先后順序是先C3還原，后CO2的固定．
（6）在實(shí)驗(yàn)過程中，用H2l8O培養(yǎng)黑藻，發(fā)現(xiàn)葉肉細(xì)胞中出現(xiàn)了（CH218O），分析其最可能的轉(zhuǎn)化途徑是：．（用相關(guān)物質(zhì)、過程和箭頭表示）

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科目：高中生物 來(lái)源： 題型：解答題

4．下列是在生產(chǎn)實(shí)踐中培育相應(yīng)動(dòng)植物的過程，請(qǐng)回答：
（1）下面是培育轉(zhuǎn)基因低乳糖奶牛的流程圖．
乳糖分解酶基因$\stackrel{導(dǎo)入}{→}$成纖維細(xì)胞→轉(zhuǎn)基因胚胎$\stackrel{移植}{→}$受體母牛$\stackrel{分娩}{→}$轉(zhuǎn)基因低乳糖奶牛
乳糖分解酶基因是具有遺傳效應(yīng)的DNA片段，將其導(dǎo)入成纖維細(xì)胞中常用的方法是顯微注射；轉(zhuǎn)基因成功之后，通常還需要通過核移植技術(shù)將成纖維細(xì)胞的細(xì)胞核移入到去掉細(xì)胞核的卵母（去核卵母）細(xì)胞中，才能培育出轉(zhuǎn)基因牛胚胎，原因是成纖維細(xì)胞的全能性受限制（卵母細(xì)胞中有促進(jìn)全能性表達(dá)的物質(zhì)）．應(yīng)選擇桑椹胚或囊胚時(shí)期的胚胎移植到受體母牛體內(nèi)，受體母牛需要經(jīng)過（同期）發(fā)情處理才適合進(jìn)行胚胎移植．
（2）為保持君子蘭親本的優(yōu)良性狀，科研人員取君子蘭幼葉培養(yǎng)出愈傷組織，然后再?gòu)挠鷤M織分化形成小植株，該過程中君子蘭的生殖方式是無(wú)性生殖/營(yíng)養(yǎng)生殖．這種技術(shù)稱為植物組織培養(yǎng)，該技術(shù)的實(shí)際應(yīng)用還有微型/快速繁殖、作物脫毒、人工種子、單倍體育種、突變體的利用、細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)等方面（答出一點(diǎn)即可）．

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科目：高中生物 來(lái)源： 題型：選擇題

1．甘氨酸（Gly）在神經(jīng)系統(tǒng)中可作為神經(jīng)遞質(zhì)作用于下一神經(jīng)元，并使下一神經(jīng)元抑制，它的受體是膜上的某種離子通道．下列有關(guān)敘述中，錯(cuò)誤的是（　�。�
A．甘氨酸與受體結(jié)合后離子通道打開，導(dǎo)致陽(yáng)離子內(nèi)流
B．如某毒素可阻止甘氨酸釋放，該毒素可破壞神經(jīng)元之間正常的抑制性沖動(dòng)的傳遞
C．突觸前膜釋放甘氨酸的方式是胞吐，該過程需要消耗能量
D．釋放到突觸間隙中的甘氨酸可被細(xì)胞吸收后再度利用

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科目：高中生物 來(lái)源： 題型：解答題

8．如圖一為小腸上皮細(xì)胞吸收葡萄糖的示意圖，GLUT是一種葡萄糖載體蛋白．圖二表示GLUT介導(dǎo)的肝細(xì)胞和原核生物細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取速率與葡萄糖濃度的關(guān)系．請(qǐng)回答下列問題：

（1）小腸上皮細(xì)胞面向腸腔的一側(cè)形成微絨毛的作用是增加消化和吸收的面積，與腸腺細(xì)胞合成和分泌消化酶相關(guān)的細(xì)胞器有核糖體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、線粒體．
（2）小腸上皮細(xì)胞膜上運(yùn)載葡萄糖的載體有GLUT、Na+驅(qū)動(dòng)的葡萄糖同向轉(zhuǎn)運(yùn)載體．
（3）葡萄糖進(jìn)入小腸上皮細(xì)胞時(shí)，伴隨著Na+內(nèi)流，在Na+-K+ATP酶的作用下消耗ATP，維持Na+在膜兩側(cè)的電化學(xué)梯度穩(wěn)定，這種運(yùn)輸方式稱為主動(dòng)運(yùn)輸（協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)）．
（4）圖二中的曲線表明，GLUT介導(dǎo)的細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取速率比自由擴(kuò)散高，B點(diǎn)與A點(diǎn)相比，制約葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)速率的因素主要是GLUT數(shù)量．GLUT介導(dǎo)的葡萄糖運(yùn)輸方式稱為協(xié)助擴(kuò)散．

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科目：高中生物 來(lái)源：2016屆湖北省襄陽(yáng)市等四校高三上期中聯(lián)考生物試卷（解析版） 題型：綜合題

在不同光照條件下某種植物光合速率（以O(shè)2釋放量為測(cè)定指標(biāo)）也有差別。下圖是在兩種不同條件下測(cè)定的植物一定時(shí)間內(nèi)的凈光合速率，請(qǐng)分析圖中數(shù)據(jù)回答下列問題

（1）在實(shí)驗(yàn)過程中，在晴天11：50時(shí)葉肉細(xì)胞產(chǎn)生ATP的場(chǎng)所有 。

（2）在圖中cd對(duì)應(yīng)時(shí)段，植物體內(nèi)有機(jī)物總量的變化情況是 。經(jīng)測(cè)定，晴天遮光條件下該植物的CO2平均釋放速率為0．8?mol/（m2·s），則a點(diǎn)時(shí)該植物O2產(chǎn)生速率為 ?mol/（m2·s）。

（3）陰天限制葉片光合速率的主要環(huán)境因素是 。若其它條件不變，對(duì)葉綠素而言，有效輻射的光主要是 。

（4）欲探究光照強(qiáng)度、溫度對(duì)該植物光合作用速率的影響，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中共同的對(duì)照組是___ __。

（5）根據(jù)圖中曲線可知晴天中午植物凈光合作用下降，直接原因是保衛(wèi)細(xì)胞 （吸水、失水），氣孔關(guān)閉，導(dǎo)致葉肉細(xì)胞中C3含量 （增加、減少）。

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科目：高中生物 來(lái)源：2016屆湖北省襄陽(yáng)市等四校高三上期中聯(lián)考生物試卷（解析版） 題型：綜合題

圖一、二是某小組探究H2O2分解條件時(shí)得到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果．圖三是該小組探究溫度對(duì)淀粉酶活性影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。試回答

（1）鑒定H2O2酶是否是蛋白質(zhì)，可用 試劑．細(xì)胞內(nèi)的酶等蛋白質(zhì)要不斷更新，其降解過程發(fā)生在 （細(xì)胞器）中。

（2）合成H2O2酶的直接能源物質(zhì)是 ，該物質(zhì)可在動(dòng)物細(xì)胞的 （場(chǎng)所）中合成。

（3）圖一、二所代表的實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)自變量依次為 、 。

（4）根據(jù)圖一可以得出的實(shí)驗(yàn)結(jié)論是 。圖三中縱坐標(biāo)y表示 。

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科目：高中生物 來(lái)源：2016屆湖北省襄陽(yáng)市等四校高三上期中聯(lián)考生物試卷（解析版） 題型：選擇題

用含32P標(biāo)記的磷酸鹽的營(yíng)養(yǎng)液培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞，一段時(shí)間后細(xì)胞的下列結(jié)構(gòu)以及化合物均有放射性的是①脫氧核糖②細(xì)胞膜③細(xì)胞壁④線粒體基質(zhì)⑤轉(zhuǎn)運(yùn)RNA⑥葉綠體基質(zhì)

A．②④⑤⑥ B．②④⑤ C．①④⑤⑥ D．①③⑥

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科目：高中生物 來(lái)源： 題型：選擇題

2．如圖表示處于平衡狀態(tài)的某生物種群因某些外界環(huán)境變化導(dǎo)致種群中生物個(gè)體數(shù)量改變時(shí)的四種情形，下列有關(guān)敘述中，不正確的是（　　）
A．圖④曲線可用于指導(dǎo)海洋捕撈，維持資源種群數(shù)量在$\frac{K}{2}$左右
B．圖③中c點(diǎn)后發(fā)生的變化表明生態(tài)系統(tǒng)的自我調(diào)節(jié)能力有一定限度的
C．若圖②所示為培養(yǎng)液中的酵母菌種群，則b點(diǎn)后的變化可能原因是天敵的減少
D．若圖①所示為草原生態(tài)系統(tǒng)中某人工種群，則a點(diǎn)后的變化可能原因是過度放牧

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