13．pBV220載體是我國預防醫(yī)學科學院病毒研究所自行構建并廣泛應用的大腸桿菌溫控載體，大小為3666bp（bp表示堿基對），其結構如下圖所示．圖中PRPL是啟動子，rrnB是基因轉(zhuǎn)錄終止信號，Ampr是氨芐抗性基因，ori是質(zhì)粒復制起點，EcoRⅠ、HindⅢ等為各種限制性內(nèi)切酶．請據(jù)圖回答下列有關問題：
（1）從圖中可看出，pBV220作為運載體具備的條件有多個限制性內(nèi)切酶的切割位點、標記基因．
（2）該質(zhì)�？杀籄、B、C三種限制性內(nèi)切酶同時切割．單獨A切割得一條長鏈，單獨B切也得一條長鏈，A和C同時切割得2個500bp和1個2666bp片段，B和C同時切割得2個250bp和1個3166bp片段．若以A的切割位點為計算起點，則B的切割位點與A點最短長度為750bp，C的兩個切割位點與A點的最距離分別為500bp、1000bp．
（3）PR和PL都是啟動子，pBV220載體構建過程中把兩個啟動子串聯(lián)在一起，形成了雙啟動子，雙啟動子的作用可能是保證目的基因的高水平表達（高效轉(zhuǎn)錄）．溫控基因CIts857編碼對溫度敏感的CIts蛋白，CIts在30℃時具有抑制啟動子的活性，在42℃時失活．促進工程菌目的基因表達的誘導溫度為42℃．

分析 基因工程技術的基本步驟：
1、目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術擴增和人工合成．
2、基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
3、將目的基因?qū)胧荏w細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因?qū)胫参锛毎姆椒ㄓ修r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱游锛毎钣行У姆椒ㄊ秋@微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛毎姆椒ㄊ歉惺軕B(tài)細胞法．
4、目的基因的檢測與鑒定：（1）分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術．（2）個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）從圖中可看出，pBV220作為運載體具備的條件有具有多個限制性內(nèi)切酶的切割位點（便于目的基因的插入）、標記基因（便于鑒定和篩選含有目的基因的受體細胞）．
（2）單獨A切割得一條長鏈，單獨B切也得一條長鏈，A和C同時切割得2個500bp和1個2666bp片段，B和C同時切割得2個250bp和1個3166bp片段，這說明該質(zhì)粒上有一個A酶切割位點、一個B酶切割位點、2個C酶切割位點．A和C同時切割得2個500bp和1個2666bp片段，說明A和C酶的一個切點之間的長度為500bp，B和C同時切割得2個250bp和1個3166bp片段，說明B和C酶的一個切點之間的長度為250bp，若以A的切割位點為計算起點，則B的切割位點與A點最短長度為500+250=750bp，C的兩個切割位點與A點的最距離分別為500bp、1000bp．
（3）PR和PL都是啟動子，pBV220載體構建過程中把兩個啟動子串聯(lián)在一起，形成了雙啟動子，雙啟動子的作用可能是保證目的基因的高水平表達（高效轉(zhuǎn)錄）．溫控基因CIts857編碼對溫度敏感的CIts蛋白，CIts在30℃時具有抑制啟動子的活性，在42℃時失活，因此要促進工程菌目的基因表達就要使CIts蛋白失活，即促進工程菌目的基因表達的誘導溫度為42℃．
故答案為：
（1）多個限制性內(nèi)切酶的切割位點      標記基因
（2）750bp     500bp     1000bp
（3）保證目的基因的高水平表達（高效轉(zhuǎn)錄）     42℃

點評 本題結合圖解，考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理、操作步驟及相關細節(jié)，能結合圖中信息準確答題，屬于考綱識記和理解層次的考查．

練習冊系列答案
相關習題

科目：高中生物 來源： 題型：解答題

3．某校生物興趣小組利用分布廣泛的黑藻為實驗材料，研究環(huán)境因素對光合作用強度的影響進行改進，圖1是根據(jù)實驗數(shù)據(jù)繪制的曲線，圖2為黑藻葉綠體結構和功能示意圖．請分析回答問題：

興趣小組將黑藻浸在加有適宜培養(yǎng)液的大試管中（室溫20℃），以白熾燈為光源，通過移動白熾燈，改變光源與大試管間的距離，觀測黑藻放出氣泡的情況，結果如圖1中曲線x所示．
（1）該實驗研究的是光照強度對光合速率的影響，用單位時間內(nèi)氧氣（氣泡）的釋放量作為光合速率的檢測指標．
（2）若將燈的距離固定在20cm，溫度適宜，光照較長時間后發(fā)現(xiàn)試管中的黑藻在單位時間內(nèi)產(chǎn)生的氣泡數(shù)逐漸減少，產(chǎn)生這一現(xiàn)象的原因是隨著光合作用的進行二氧化碳越來越少．
（3）該小組在室溫、10℃和30℃時分別進行了實驗，結果如圖1，D點的限制因素是溫度．
（4）研究者分離黑藻葉綠體（圖2）適宜條件培養(yǎng)，由結構①轉(zhuǎn)移至結構②物質(zhì)主要是ATP和[H]．
（5）當光源與大試管間的距離由45cm逐漸改變?yōu)?0cm的過程中，圖2中反應Ⅱ中的兩個化學反應過程變慢的先后順序是先C3還原，后CO2的固定．
（6）在實驗過程中，用H2l8O培養(yǎng)黑藻，發(fā)現(xiàn)葉肉細胞中出現(xiàn)了（CH218O），分析其最可能的轉(zhuǎn)化途徑是：．（用相關物質(zhì)、過程和箭頭表示）

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科目：高中生物 來源： 題型：解答題

4．下列是在生產(chǎn)實踐中培育相應動植物的過程，請回答：
（1）下面是培育轉(zhuǎn)基因低乳糖奶牛的流程圖．
乳糖分解酶基因$\stackrel{導入}{→}$成纖維細胞→轉(zhuǎn)基因胚胎$\stackrel{移植}{→}$受體母牛$\stackrel{分娩}{→}$轉(zhuǎn)基因低乳糖奶牛
乳糖分解酶基因是具有遺傳效應的DNA片段，將其導入成纖維細胞中常用的方法是顯微注射；轉(zhuǎn)基因成功之后，通常還需要通過核移植技術將成纖維細胞的細胞核移入到去掉細胞核的卵母（去核卵母）細胞中，才能培育出轉(zhuǎn)基因牛胚胎，原因是成纖維細胞的全能性受限制（卵母細胞中有促進全能性表達的物質(zhì)）．應選擇桑椹胚或囊胚時期的胚胎移植到受體母牛體內(nèi)，受體母牛需要經(jīng)過（同期）發(fā)情處理才適合進行胚胎移植．
（2）為保持君子蘭親本的優(yōu)良性狀，科研人員取君子蘭幼葉培養(yǎng)出愈傷組織，然后再從愈傷組織分化形成小植株，該過程中君子蘭的生殖方式是無性生殖/營養(yǎng)生殖．這種技術稱為植物組織培養(yǎng)，該技術的實際應用還有微型/快速繁殖、作物脫毒、人工種子、單倍體育種、突變體的利用、細胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)等方面（答出一點即可）．

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科目：高中生物 來源： 題型：選擇題

1．甘氨酸（Gly）在神經(jīng)系統(tǒng)中可作為神經(jīng)遞質(zhì)作用于下一神經(jīng)元，并使下一神經(jīng)元抑制，它的受體是膜上的某種離子通道．下列有關敘述中，錯誤的是（　�。�
A．甘氨酸與受體結合后離子通道打開，導致陽離子內(nèi)流
B．如某毒素可阻止甘氨酸釋放，該毒素可破壞神經(jīng)元之間正常的抑制性沖動的傳遞
C．突觸前膜釋放甘氨酸的方式是胞吐，該過程需要消耗能量
D．釋放到突觸間隙中的甘氨酸可被細胞吸收后再度利用

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科目：高中生物 來源： 題型：解答題

8．如圖一為小腸上皮細胞吸收葡萄糖的示意圖，GLUT是一種葡萄糖載體蛋白．圖二表示GLUT介導的肝細胞和原核生物細胞對葡萄糖的攝取速率與葡萄糖濃度的關系．請回答下列問題：

（1）小腸上皮細胞面向腸腔的一側(cè)形成微絨毛的作用是增加消化和吸收的面積，與腸腺細胞合成和分泌消化酶相關的細胞器有核糖體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、線粒體．
（2）小腸上皮細胞膜上運載葡萄糖的載體有GLUT、Na+驅(qū)動的葡萄糖同向轉(zhuǎn)運載體．
（3）葡萄糖進入小腸上皮細胞時，伴隨著Na+內(nèi)流，在Na+-K+ATP酶的作用下消耗ATP，維持Na+在膜兩側(cè)的電化學梯度穩(wěn)定，這種運輸方式稱為主動運輸（協(xié)同轉(zhuǎn)運）．
（4）圖二中的曲線表明，GLUT介導的細胞對葡萄糖的攝取速率比自由擴散高，B點與A點相比，制約葡萄糖轉(zhuǎn)運速率的因素主要是GLUT數(shù)量．GLUT介導的葡萄糖運輸方式稱為協(xié)助擴散．

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科目：高中生物 來源：2016屆湖北省襄陽市等四校高三上期中聯(lián)考生物試卷（解析版） 題型：綜合題

在不同光照條件下某種植物光合速率（以O2釋放量為測定指標）也有差別。下圖是在兩種不同條件下測定的植物一定時間內(nèi)的凈光合速率，請分析圖中數(shù)據(jù)回答下列問題

（1）在實驗過程中，在晴天11：50時葉肉細胞產(chǎn)生ATP的場所有 。

（2）在圖中cd對應時段，植物體內(nèi)有機物總量的變化情況是 。經(jīng)測定，晴天遮光條件下該植物的CO2平均釋放速率為0．8?mol/（m2·s），則a點時該植物O2產(chǎn)生速率為 ?mol/（m2·s）。

（3）陰天限制葉片光合速率的主要環(huán)境因素是 。若其它條件不變，對葉綠素而言，有效輻射的光主要是 。

（4）欲探究光照強度、溫度對該植物光合作用速率的影響，實驗設計中共同的對照組是___ __。

（5）根據(jù)圖中曲線可知晴天中午植物凈光合作用下降，直接原因是保衛(wèi)細胞 （吸水、失水），氣孔關閉，導致葉肉細胞中C3含量 （增加、減少）。

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科目：高中生物 來源：2016屆湖北省襄陽市等四校高三上期中聯(lián)考生物試卷（解析版） 題型：綜合題

圖一、二是某小組探究H2O2分解條件時得到的實驗結果．圖三是該小組探究溫度對淀粉酶活性影響的實驗結果。試回答

（1）鑒定H2O2酶是否是蛋白質(zhì)，可用 試劑．細胞內(nèi)的酶等蛋白質(zhì)要不斷更新，其降解過程發(fā)生在 （細胞器）中。

（2）合成H2O2酶的直接能源物質(zhì)是 ，該物質(zhì)可在動物細胞的 （場所）中合成。

（3）圖一、二所代表的實驗中，實驗自變量依次為 、 。

（4）根據(jù)圖一可以得出的實驗結論是 。圖三中縱坐標y表示 。

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科目：高中生物 來源：2016屆湖北省襄陽市等四校高三上期中聯(lián)考生物試卷（解析版） 題型：選擇題

用含32P標記的磷酸鹽的營養(yǎng)液培養(yǎng)動物細胞，一段時間后細胞的下列結構以及化合物均有放射性的是①脫氧核糖②細胞膜③細胞壁④線粒體基質(zhì)⑤轉(zhuǎn)運RNA⑥葉綠體基質(zhì)

A．②④⑤⑥ B．②④⑤ C．①④⑤⑥ D．①③⑥

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科目：高中生物 來源： 題型：選擇題

2．如圖表示處于平衡狀態(tài)的某生物種群因某些外界環(huán)境變化導致種群中生物個體數(shù)量改變時的四種情形，下列有關敘述中，不正確的是（　　）
A．圖④曲線可用于指導海洋捕撈，維持資源種群數(shù)量在$\frac{K}{2}$左右
B．圖③中c點后發(fā)生的變化表明生態(tài)系統(tǒng)的自我調(diào)節(jié)能力有一定限度的
C．若圖②所示為培養(yǎng)液中的酵母菌種群，則b點后的變化可能原因是天敵的減少
D．若圖①所示為草原生態(tài)系統(tǒng)中某人工種群，則a點后的變化可能原因是過度放牧

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