Question

下面是煙草葉片原生質(zhì)體分離和培養(yǎng)的流程圖：

請(qǐng)回答：
（1）酶解時(shí)，在纖維素酶和果膠酶的混合液中，還需添加

 

來提高混合液的滲透壓，以利于獲得完整的原生質(zhì)體．
（2）獲得原生質(zhì)體后，可用

 

方法檢測(cè)原生質(zhì)體是否存活．然后將原生質(zhì)體制成懸浮液，滴加在

 

上，用顯微鏡觀察并計(jì)數(shù)．要判定原生質(zhì)體是否已形成細(xì)胞壁，可用

 

方法鑒別．
（3）欲通過原生質(zhì)體培養(yǎng)得到愈傷組織，從培養(yǎng)基的成分考慮，配制培養(yǎng)基時(shí)需要注意的主要方面有哪些？

 

．

Answer 1

考點(diǎn)：植物培養(yǎng)的條件及過程

專題：

分析：植物體細(xì)胞雜交是首先用纖維素酶和果膠酶去除細(xì)胞壁，獲得原生質(zhì)體；用物理法（離心、振動(dòng)、電刺激）或者化學(xué)法（聚乙二醇）誘導(dǎo)細(xì)胞融合，獲得融合的原生質(zhì)體；原生質(zhì)體再生出細(xì)胞壁，獲得雜種細(xì)胞；雜種細(xì)胞經(jīng)過脫分化和再分化獲得雜種植株．

解答： 解：（1）在獲得植物原生質(zhì)體時(shí)，需在0.5～0.6mol/L的甘露醇溶液環(huán)境（較高滲透壓）下用纖維素酶和果膠酶混合液處理實(shí)驗(yàn)材料，將細(xì)胞壁消化除去，獲得球形的原生質(zhì)體．
（2）獲得原生質(zhì)體后可用紅墨水染色法檢測(cè)，因?yàn)樯�活狀態(tài)的原生質(zhì)體細(xì)胞膜具有選擇透過性，原生質(zhì)體不會(huì)被染上顏色，但如果原生質(zhì)體死亡，由膜的選擇透過性喪失，原生質(zhì)體會(huì)被染成紅色；對(duì)原生質(zhì)體進(jìn)行顯微計(jì)數(shù)，必須將原生質(zhì)體制成的懸浮液滴加在血細(xì)胞計(jì)數(shù)板上；可用質(zhì)壁分離實(shí)驗(yàn)來檢測(cè)原生質(zhì)體是否已經(jīng)形成細(xì)胞壁．
（3）要將原生質(zhì)體培養(yǎng)成愈傷組織，配置培養(yǎng)基時(shí)需要注意營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的適當(dāng)配比和植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的適當(dāng)配比．
故答案為：
（1）甘露醇
（2）紅墨水染色       血細(xì)胞計(jì)數(shù)板         質(zhì)壁分離
（3）營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的適當(dāng)配比和植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的適當(dāng)配比

點(diǎn)評(píng)：本題考查原生質(zhì)體分離和培養(yǎng)，意在考查考生能理解所學(xué)知識(shí)的要點(diǎn)，把握知識(shí)間的內(nèi)在聯(lián)系，形成知識(shí)的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的能力．要注意，目前應(yīng)用最廣泛的是聚乙二醇（PEG），因?yàn)樗�易得、�?jiǎn)便，且融合效果穩(wěn)定．PEG的促融機(jī)制尚不完全清楚，它可能引起細(xì)胞膜中磷脂的酰鍵及極性基團(tuán)發(fā)生結(jié)構(gòu)重排．