Question

【題目】科研人員利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對(duì)干擾素基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療，其技術(shù)流程如圖1。圖2表示目的基因及限制酶切點(diǎn)，圖3表示質(zhì)粒，據(jù)圖回答：

（1）重組細(xì)胞的細(xì)胞核來自______________細(xì)胞。

（2）將基因?qū)�入ES細(xì)胞而不是導(dǎo)入上皮細(xì)胞是因?yàn)镋S細(xì)胞具有______________。

（3）步驟③，需要構(gòu)建含有干擾素基因______________。

（4）從基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中查詢干擾素基因的核苷酸序列，以便根據(jù)真訓(xùn)練設(shè)計(jì)合成引物用于PCR擴(kuò)增，PCR擴(kuò)增過程至少第____________輪循環(huán)后才能獲得純目的基因片段（僅含引物之間的序列）。

（5）對(duì)于干擾素基因片段和質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切時(shí)，可選用限制酶的組合為____________或____________。

（6）將步驟③獲得的ES細(xì)胞在熒光顯微鏡下觀察，選擇發(fā)___________色熒光的細(xì)胞進(jìn)行體外誘導(dǎo)。為檢測(cè)干擾素基因是否表達(dá)，可以采用___________的方法。

Answer 1

【答案】（1）（干擾素基因缺失小鼠的）上皮細(xì)胞 （2）全能性 （3）基因表達(dá)載體

（4）3（2分） （5）HindIII和PstI EcoRI和PstI （6）綠 抗原—抗體雜交

【解析】

試題分析：：（1）重組細(xì)胞的細(xì)胞核來自上皮細(xì)胞

（2）將基因?qū)�入ES細(xì)胞而不是導(dǎo)入到上皮細(xì)胞是因?yàn)镋S細(xì)胞具有全能性．

（3）步驟③是將目的基因?qū)�入ES細(xì)胞，該過程之前需要構(gòu)建基因表達(dá)載體；

（4）因?yàn)榍皟奢喲�環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物上目的基因上都帶有模板DNA其他片段，即擴(kuò)增產(chǎn)物比目的基因的DNA片段長(zhǎng)，第三輪就有了純目的基因片段了

（5）由圖可知，SamⅠ酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)位于目的基因上，用該酶切割會(huì)破壞目的基因，因此對(duì)干擾素基因片段和質(zhì)粒進(jìn)行酶切時(shí)，可選用限制酶HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ

（6）用限制酶HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ切割時(shí)會(huì)破壞紅色熒光蛋白基因，但不會(huì)破壞綠色熒光蛋白基因，因此將步驟③獲得的ES細(xì)胞在熒光顯微鏡下觀察，選擇發(fā)綠色熒光的細(xì)胞進(jìn)行體外誘導(dǎo)．為檢測(cè)干擾素基因是否表達(dá)，可以采用抗原-抗體雜交法