Question

【題目】圖1表示含有目的基因D的DNA片段長度（bp即堿基對）和部分堿基序列，圖2表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列。現(xiàn)有Msp Ⅰ、BamH Ⅰ、Mbo Ⅰ、Sma Ⅰ4種限制性核酸內(nèi)切酶切割的堿基序列和酶切位點分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。請回答下列問題：

（1）圖1的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個堿基之間依次由______連接。

（2）若用限制酶Sma Ⅰ完全切割圖1中DNA片段，產(chǎn)生的末端是_____末端，其產(chǎn)物長度為_____。

（3）若圖1中虛線方框內(nèi)的堿基對被T－A堿基對替換，那么基因D就突變?yōu)榛��?/span>d。從雜合子分離出圖1及其對應的DNA片段，用限制酶Sma Ⅰ完全切割，產(chǎn)物中共有_____種不同DNA片段。

（4）若將圖2中質(zhì)粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進行，形成重組質(zhì)粒，那么應選用的限制酶是_____。在導入重組質(zhì)粒后，為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌，一般需要用添加_____的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。經(jīng)檢測，部分含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達，其最可能的原因是_______________。

Answer 1

【答案】脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖 平 537bp、790bp、661bp 4 BamH I 抗生素B 同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D與質(zhì)粒反向連接

【解析】

圖1中DNA片段含有2個限制酶SmaⅠ切割位點，基因D兩側(cè)序列為GGATCC，可被限制酶BamHⅠ切割。圖2中：質(zhì)粒含有CCGG序列、GGATCC序列和GATC序列。

（1）脫氧核苷酸鏈相鄰兩堿基之間依次是脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖。

（2）Sma Ⅰ酶切點是CCC↓GGG，所以產(chǎn)生末端是平末端，根據(jù)圖1中的酶切位點，可判斷用限制酶SmaⅠ完全切割該DNA片段，左邊534+3=537bp，中間796-6=790bp，右邊658+3=661bbp三個片段。

（3）由圖可知目的基因D有2個酶切位點，雜合子D可以切成3種不同長度的，突變后的d只有1個酶切位點可以切成2種不同長度的，其中有1種是和D相同，故共產(chǎn)生4種不同長度的片段。

（4）由圖可知目的基因要完全切割下來可以用BamHI酶，用MboI酶也可以，同樣質(zhì)粒上也都有該酶切位點，但用MboI酶切后會將質(zhì)粒上的2個抗性基因都破壞掉無法進行篩選，用BamHI酶切后質(zhì)粒的抗生素A基因被破壞，故只能用含抗生素B的培養(yǎng)基鑒定。目的基因連進入但不能正確表達最可能的原因是因為同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D與質(zhì)粒反向連接。