Question

16．在固體培養(yǎng)基中加入溶解性差、但可被微生物利用的酪蛋白，形成渾濁、不透明的培養(yǎng)基背景．當(dāng)培養(yǎng)基中的酪蛋白被微生物分泌的蛋白酶分解后，菌落（沉淀圈）的周圍就會(huì)形成透明圈（如右圖）．透明圈的大小反映了菌落利用蛋白質(zhì)的能力．利用這種培養(yǎng)基可以篩選產(chǎn)蛋白酶菌株．下面是生物研究小組從土壤中篩選產(chǎn)蛋白酶菌株的方案．請(qǐng)協(xié)助完成方案，并回答有關(guān)問題：
實(shí)驗(yàn)步驟：
第一步：制備固體平板培養(yǎng)基：計(jì)算→稱量→溶化→調(diào)pH→滅菌→倒平板．
第二步：運(yùn)用稀釋涂布平板法分離純化菌株：分別梯度稀釋制備土壤浸出液，吸取少量的土壤浸出液，注入培養(yǎng)基平板中，涂布均勻．然后置于溫度28℃的恒溫箱中，培養(yǎng)36h．
第三步：初篩菌種：從上一步培養(yǎng)基平板上挑選單細(xì)胞菌落，分別接種于篩選培養(yǎng)基中，在28℃下培養(yǎng)48h．挑選透明圈大而沉淀圈小的菌株，作為初篩菌株．
回答下列問題：
（1）補(bǔ)全“制備微生物固體培養(yǎng)基”的主要操作步驟①滅菌，②倒平板．
（2）實(shí)驗(yàn)用的培養(yǎng)皿常用的兩種滅菌方法是干熱滅菌和濕熱滅菌（高壓蒸汽滅菌）；滅菌后的培養(yǎng)基應(yīng)適當(dāng)冷卻到50℃后，在酒精燈附近倒平板．
（3）“菌落”在生態(tài)學(xué)上屬于種群層次的生命系統(tǒng)，“稀釋涂布平板法”純化菌種的原理是在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能夠在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落．
（4）初篩菌株的菌落周圍“透明圈大”說明沉淀圈中的微生物分泌的蛋白酶活性高．
（5）為了將分離到的菌株純化，挑取了菌落在3塊相同平板上劃線，結(jié)果其中一塊平板的各劃線區(qū)均未見菌落生長，最可能的原因是接種環(huán)溫度過高，菌被殺死．
（6）研究人員將初篩菌株接種于發(fā)酵液中，在適宜條件下培養(yǎng)，并每隔一定時(shí)間取樣檢測(cè)發(fā)酵液中蛋白酶的活性，最終發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)的早期，發(fā)酵液中蛋白酶活性迅速升高，這可能與培養(yǎng)液中菌株數(shù)量增加、分泌的蛋白酶增多有關(guān)．

Answer 1

分析 本題主要考查微生物的培養(yǎng)基的制作、滅菌、接種、微生物的代謝等知識(shí)，回顧和梳理生物技術(shù)實(shí)踐中的相關(guān)知識(shí)，認(rèn)真分析各小題，即可正確作答．

解答 解：（1）制備固體平板培養(yǎng)基的主要操作步驟是：計(jì)算、稱量、溶化、調(diào)整pH、滅菌和倒平板．
（2）實(shí)驗(yàn)用的培養(yǎng)皿常用的兩種滅菌方法是干熱滅菌和濕熱滅菌（高壓蒸汽滅菌）．滅菌后的培養(yǎng)基應(yīng)適當(dāng)冷卻到50℃左右后倒平板．
（3）菌落屬于種群．“稀釋涂布平板法”純化菌種的原理是在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能夠在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落．
（4）根據(jù)題意可知，透明圈大說明沉淀圈中的微生物分泌的蛋白酶活性高．
（5）題目中可能的原因是接種環(huán)溫度過高，菌被殺死，結(jié)果導(dǎo)致其中一塊平板的各劃線區(qū)均未見菌落生長．
（6）在培養(yǎng)的早期，發(fā)酵液中蛋白酶活性迅速升高，這可能與培養(yǎng)液中菌株數(shù)量增加、分泌的蛋白酶增多有關(guān)．
故答案為：
（1）①滅菌       ②倒平板      
（2）干熱滅菌和濕熱滅菌（高壓蒸汽滅菌）    50℃
（3）種群    單個(gè)細(xì)胞     
（4）高     
（5）接種環(huán)溫度過高，菌被殺死     
（6）培養(yǎng)液中菌株數(shù)量增加、分泌的蛋白酶增多

點(diǎn)評(píng) 本題主要考查生物技術(shù)實(shí)踐中的微生物的培養(yǎng)基的制作、無菌操作、接種培養(yǎng)等知識(shí)，意在強(qiáng)化學(xué)生對(duì)相關(guān)知識(shí)的識(shí)記、理解與運(yùn)用．