Question

【題目】內(nèi)皮素（ET）是一種多肽，它有促進(jìn)血管收縮和平滑肌細(xì)胞增殖等作用。內(nèi)皮素主要通過與靶細(xì)胞膜上的內(nèi)皮素受體（ETA）結(jié)合而發(fā)揮生理效應(yīng)�？蒲腥藛T通過構(gòu)建基因的表達(dá)載體，實(shí)現(xiàn)ETA基因在細(xì)胞中高效表達(dá)，其過程如下（圖中SNAP基因是一種熒光蛋白基因，限制酶ApaⅠ的識(shí)別序列為C↓CCGGG，限制酶XhoⅠ的識(shí)別序列為C↓TCGAG）。請(qǐng)分析回答：

（1）完成過程①需要的酶是______________；過程①的最后階段要將反應(yīng)體系的溫度升高到95℃，其目的是使RNA鏈和___________鏈分開。

（2）過程③中，限制酶XhoⅠ切割DNA，使_____________________鍵斷開，形成目的基因的黏性末端是_____________（選填“TCGA-”或“-TCGA”）。用______種限制酶切割，獲得不同的黏性末端，其主要目的是使目的基因定向連接到載體上（或防止目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化）。

（3）過程⑥是否成功導(dǎo)入，可將大腸桿菌培養(yǎng)在含有________________的培養(yǎng)基中進(jìn)行篩選。

（4）利用SNAP基因與ETA基因結(jié)合構(gòu)成融合基因，目的是通過熒光顯微檢測(cè)間接判斷ETA基因能否__________。

（5）內(nèi)皮素能刺激黑色素細(xì)胞的分化、增殖并激活酪氨酸酶的活性，從而使黑色素急劇增加。美容時(shí)可以利用注射ETA達(dá)到美白祛斑效果，這是因?yàn)?/span>ETA能與內(nèi)皮素結(jié)合，減少了內(nèi)皮素與黑色素細(xì)胞膜上_____________的結(jié)合，抑制了黑色素細(xì)胞的增殖和黑色素的形成。

Answer 1

【答案】逆轉(zhuǎn)錄酶（反轉(zhuǎn)錄酶） cDNA（DNA、脫氧核苷酸） 磷酸二酯 TCGA-（或-AGCT） 兩（2、不同） 氨芐青霉素 表達(dá) 特異性受體（受體、內(nèi)皮素受體）

【解析】

分析題圖，①②③表示反轉(zhuǎn)錄法獲得目的基因的過程，④表示構(gòu)建基因表達(dá)載體，⑤表示限制酶切割質(zhì)粒，⑥表示重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞，⑦表示目的基因的檢測(cè)。

（1）過程①是逆轉(zhuǎn)錄過程，需要逆轉(zhuǎn)錄酶的催化；過程①的最后階段要將反應(yīng)體系的溫度升高到95℃，其目的是使RNA鏈和cDNA鏈分開。

（2）過程③中，限制酶XhoⅠ切割DNA，使得DNA中的磷酸二酯鍵斷開，根據(jù)題意，限制酶XhoⅠ的識(shí)別序列為C↓TCGAG，則切割后形成目的基因的黏性末端是-AGCT。圖中顯示利用了兩種限制酶切割目的基因和載體，從而獲得了不同的黏性末端，可以防止目的基因和載體發(fā)生自身環(huán)化，使目的基因定向連接到載體上。

（3）據(jù)圖可知，重組質(zhì)粒中氨芐青霉素抗性基因完整，故要確定過程⑥是否成功導(dǎo)入，可依靠標(biāo)記基因進(jìn)行篩選，將大腸桿菌培養(yǎng)在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基中進(jìn)行篩選。

（4）利用SNAP基因與ETA基因結(jié)合構(gòu)成融合基因，目的是通過熒光顯微檢測(cè)間接判斷ETA基因能否表達(dá)。

（5）據(jù)題意，內(nèi)皮素主要通過與靶細(xì)胞膜上的內(nèi)皮素受體（ETA）結(jié)合而發(fā)揮生理效應(yīng)。內(nèi)皮素能刺激黑色素細(xì)胞的分化、增殖并激活酪氨酸酶的活性，從而使黑色素急劇增加。美容時(shí)可以利用注射ETA達(dá)到美白祛斑效果，這是因?yàn)?/span>ETA能與內(nèi)皮素結(jié)合，減少了內(nèi)皮素與黑色素細(xì)胞膜上特異性受體的結(jié)合，抑制了黑色素細(xì)胞的增殖和黑色素的形成。