Question

【題目】將動(dòng)物致病菌的抗原基因?qū)�入馬鈴薯制成植物疫苗，飼喂轉(zhuǎn)基因馬鈴薯可使動(dòng)物獲得免疫力．以下是與植物疫苗制備過程相關(guān)的圖和表．

表1 引物對(duì)序列表

引物對(duì)A	P1　AACTGAAATGTAGCTATC P2　TTAAGTCCATTACTCTAG
引物對(duì)B	S1　GTCCGACTAGTGGCTGTG S2　AGCTGGCGTTTAGCCTCG

表2 幾種限制酶識(shí)別序列及切割位點(diǎn)表

限制酶	AluⅠ	EcoRⅠ	PstⅠ	SmaⅠ
切割位點(diǎn)	AG↓CT TC↑GA	G↓AATTC CTTAA↑G	CTGCA↓G G↑ACGTC	CCC↓GGG GGG↑CCC

請(qǐng)根據(jù)以上圖表回答下列問題．

（1）在采用常規(guī)PCR方法擴(kuò)增目的基因的過程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物體內(nèi)的DNA聚合酶，其最主要的特點(diǎn)是 ．

（2）PCR過程中退火（復(fù)性）溫度必須根據(jù)引物的堿基數(shù)量和種類來設(shè)定．表1為根據(jù)模板設(shè)計(jì)的兩對(duì)引物序列，圖2為引物對(duì)與模板結(jié)合示意圖．請(qǐng)判斷哪一對(duì)引物可采用較高的退火溫度？ ．

（3）圖1步驟③所用的DNA連接酶對(duì)所連接的DNA兩端堿基序列是否有專一性要求？ ．

（4）為將外源基因轉(zhuǎn)入馬鈴薯，圖1步驟⑥轉(zhuǎn)基因所用的細(xì)菌B通常為 ．

（5）對(duì)符合設(shè)計(jì)要求的重組質(zhì)粒T進(jìn)行酶切．假設(shè)所用的酶均可將識(shí)別位點(diǎn)完全切開，請(qǐng)根據(jù)圖1中標(biāo)示的酶切位點(diǎn)和表2所列的識(shí)別序列，對(duì)以下酶切結(jié)果作出判斷．

①采用EcoRⅠ和PstⅠ酶切，得到 種DNA片段．

②采用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切得到 種DNA片段．

Answer 1

【答案】（1）耐高溫

（2）引物對(duì)B

（3）否

（4）農(nóng)桿菌

（5）①1 ②2

【解析】

試題分析：（1）PCR方法擴(kuò)增目的基因的過程中，需要進(jìn)行高溫解鏈過程，因此使用的DNA聚合酶要具有耐高溫的特性．

（2）耐高溫的DNA分子中通常含有G與C堿基比例大，因?yàn)樗鼈冎�間形成三個(gè)氫鍵，穩(wěn)定性強(qiáng)．引物B中含C與G的堿基對(duì)較多，可采用較高的退火溫度．

（3）多種限制酶切割，形成不同的切割位點(diǎn)，所用的DNA連接酶對(duì)所連接的DNA兩端堿基序列就沒有專一性要求．

（4）植物基因工程中，將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，因此常用農(nóng)桿菌做受體細(xì)胞．

（5）據(jù)圖分析，用到了EcoR I酶和Alu I酶切割抗原DNA片段產(chǎn)生了X、Y兩個(gè)片段，而用EcoR I酶和SmaI酶切割質(zhì)粒產(chǎn)生了 M、N兩個(gè)片段，且M、N片段間存在Pst I酶切點(diǎn)．因此再用EcoRⅠ和PstⅠ酶切割這兩片段形成的重組質(zhì)粒，由于保留了Pstl的切割位點(diǎn)，所以可以得到兩種DNA分子，而用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切重組質(zhì)粒中，如圖I﹣②過程只能產(chǎn)生一種DNA片斷．

故答案為：（1）耐高溫

（2）引物對(duì)B

（3）否

（4）農(nóng)桿菌

（5）①1 ②2