Question

【題目】如圖為某質(zhì)粒表達(dá)載體簡(jiǎn)圖，小箭頭所指分別為限制酶39．如圖為某質(zhì)粒表達(dá)載體簡(jiǎn)圖，小箭頭所指分別為限制酶EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位點(diǎn)，ampR為青霉素抗性基因，tctR為四環(huán)素抗性基因，P為啟動(dòng)子，T為終止子，ori為復(fù)制原點(diǎn)。又知植物甲具有極強(qiáng)的耐旱性，其耐旱性與某個(gè)基因有關(guān)。若從該植物中獲得該耐旱基因，并將其轉(zhuǎn)移到耐旱性低的植物乙中，有可能提高后者的耐旱性。已知耐旱基因兩端分別有包括EcoRⅠ、BamHⅠ在內(nèi)的多種酶的酶切位點(diǎn)。據(jù)圖回答：

（1）獲得耐旱基因常用基因文庫(kù)法。理論上， 文庫(kù)中含有該生物的全部基因；而 文庫(kù)中含有生物的部分基因。

（2）實(shí)驗(yàn)中，為了防止目的基因和質(zhì)粒表達(dá)載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，酶切時(shí)應(yīng)選用的酶是 。酶切產(chǎn)物用DNA連接酶處理后，兩兩連接的產(chǎn)物有 種。

（3）將上述連接產(chǎn)物導(dǎo)入無任何抗藥性的宿主細(xì)胞后，將這些宿主細(xì)胞接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，能正常生長(zhǎng)的宿主細(xì)胞所含有的連接產(chǎn)物是 。

（4）目的基因表達(dá)時(shí)，RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)是 ，其合成的產(chǎn)物是 。

（5）假如用得到的二倍體轉(zhuǎn)基因耐旱植株自交，子代中耐旱植株與不耐旱植株的數(shù)量比為3：1時(shí)，則可推測(cè)該耐旱基因整合到了 （填“同染色體的一條上”或“同染色體的兩條上”）。

Answer 1

【答案】（1）基因組文庫(kù) cDNA文庫(kù)

（2）EcoRⅠ和BamHⅠ 3

（3）載體-載體連接物（或質(zhì)粒-質(zhì)粒連接物）

（4）啟動(dòng)子 mRNA

（5）同染色體的一條上

【解析】（1）基因文庫(kù)包括兩種，其中基因組文庫(kù)含有該生物的全部基因；而cDNA文庫(kù)文庫(kù)中含有生物的部分基因。

（2）為了防止目的基因和質(zhì)粒表達(dá)載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，應(yīng)該選擇EcoRⅠ和BamHⅠ進(jìn)行切割。酶切產(chǎn)物用DNA連接酶處理后，兩兩連接的產(chǎn)物有質(zhì)粒與質(zhì)粒、質(zhì)粒與目的基因、目的基因與目的基因3種。

（3）由于目的基因上沒有抗四環(huán)素的基因，所以將上述連接產(chǎn)物導(dǎo)入無任何抗藥性的宿主細(xì)胞后，將這些宿主細(xì)胞接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，能正常生長(zhǎng)的宿主細(xì)胞所含有的連接產(chǎn)物是載體-載體連接物（或質(zhì)粒-質(zhì)粒連接物）。

（4）基因表達(dá)載體中，啟動(dòng)子被RNA聚合酶識(shí)別后開始轉(zhuǎn)錄，形成mRNA。

（5）假如用得到的二倍體轉(zhuǎn)基因耐旱植株自交，子代中耐旱與不耐旱植株的數(shù)量比為3：1時(shí)，該比例符合雜合子（Aa）自交后代的結(jié)果，則可推測(cè)該耐旱基因（A）整合到了同源染色體的一條上。