Question

8．內(nèi)皮素（ET）是一種含21個氨基酸的多肽．內(nèi)皮素主要通過與靶細胞膜上的內(nèi)皮素受體結(jié)合而發(fā)揮生物學效應．ET_A是內(nèi)皮素的主要受體，科研人員試圖通過構(gòu)建表達載體，實現(xiàn)ET_A基因在細胞中高效表達，為后期ET_A的體外研究奠定基礎．其過程如圖（圖中SNAP基因是一種熒光蛋白基因，限制酶ApaⅠ的識別序列為-C↓CCGGG-，限制酶XhoⅠ的識別序列為-C↓TCGAG-）．請分析回答下列問題：

（1）完成過程①需要的酶是逆轉(zhuǎn)錄酶．
（2）過程③中，兩種限制酶在切割DNA時，將磷酸二酯鍵斷開，寫出限制酶XhoⅠ切割形成的一個黏性末端-AGCT（或）．
（3）在滿足條件的情況下，圖過程中③與⑤用兩種限制酶分別切割目的基因與質(zhì)粒，獲得不同的黏性末端構(gòu)建表達載體的方法與用同一種限制酶切割構(gòu)建表達載體相比，其優(yōu)點是使目的基因定向連接到載體上．
（4）過程⑥中，要用Ca²⁺（或CaCl₂）預先處理大腸桿菌，使其轉(zhuǎn)變?yōu)槟軌蛭�收周圍環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)細胞．為了將該過程獲得的含重組質(zhì)粒的大腸桿菌篩選出來，應使用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基．
（5）圖示過程中將SNAP基因與ET_A基因結(jié)合構(gòu)成融合基因，目的是檢測ET_A基因能否表達及表達量．

Answer 1

分析 分析題圖：1、2、3過程表示通過反轉(zhuǎn)錄法獲得目的基因的過程，4表示基因表達載體的構(gòu)建過程，5表示利用限制酶切割質(zhì)粒的過程，6表示將重組質(zhì)粒導入受體細胞的過程，7表示目的基因的檢測．

解答 解：（1）圖中①是逆轉(zhuǎn)錄過程，需要逆轉(zhuǎn)錄酶的催化．
（2）限制酶切割DNA時，切斷的是磷酸二酯鍵；③是利用限制酶XhoⅠ切割DNA獲得目的基因的過程，由于限制酶XhoⅠ的識別序列為C↓TCGAG，因此其切割形成的黏性末端是-AGCT（或）．
（3）圖中顯示利用了兩種限制酶切割目的基因和載體，從而獲得了不同的黏性末端，這種構(gòu)建基因表達載體的方法與與用同一種限制酶切割構(gòu)建表達載體相比，可以防止目的基因與運載體反向連接，即可以使目的基因定向連接到載體上．
（4）將目的基因?qū)�入微生物細胞常用感受態(tài)轉(zhuǎn)化法，即用Ca²⁺（或CaCl₂）預先處理大腸桿菌，使其處于容易吸收外界DNA的感受態(tài)．由圖可知，標記基因是氨芐青霉素抗性基因，因此為了將該過程獲得的含重組質(zhì)粒的大腸桿菌篩選出來，應使用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基．
（5）利用SNAP基因與ET_A基因結(jié)合構(gòu)成融合基因，可以檢測ET_A基因能否表達及表達量．
故答案為：
（1）逆轉(zhuǎn)錄酶
（2）磷酸二酯-AGCT（或）　  
（3）使目的基因定向連接到載體上
（4）Ca²⁺（或CaCl₂）     感受態(tài)氨芐青霉素
（5）檢測ET_A基因能否表達及表達量

點評 本題結(jié)合轉(zhuǎn)基因香蕉形成的流程圖，考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，能結(jié)合圖中信息準確答題．