Question

12．繼哺乳動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器研發(fā)成功后，膀胱生物反應(yīng)器的研究也取得了一定進(jìn)展．最近，科學(xué)家培育出一種轉(zhuǎn)基因小鼠，其膀胱上皮細(xì)胞可以合成人的生長(zhǎng)激素并分泌到尿液中．請(qǐng)回答：
（1）將人的生長(zhǎng)激素基因?qū)�入小鼠受體細(xì)胞中，常用方法是顯微注射法．
（2）進(jìn)行轉(zhuǎn)基因時(shí)，通常要將外源基因轉(zhuǎn)入受精卵或早期胚胎細(xì)胞細(xì)胞中，原因是受精卵或早期胚胎細(xì)胞具有全能性，可使外源基因在相應(yīng)組織細(xì)胞中表達(dá)．
（3）通常采用DNA分子雜交技術(shù)檢測(cè)外源基因是否插入了小鼠的基因組．為了檢測(cè)生長(zhǎng)激素基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，可用標(biāo)記的生長(zhǎng)激素基因片段作探針與mRNA雜交，該雜交技術(shù)稱(chēng)為DNA-RNA分子雜交．為了檢測(cè)胰島素基因轉(zhuǎn)錄的mRNA是否翻譯成生長(zhǎng)激素，常用抗原-抗體雜交技術(shù)．
（4）在研制膀胱生物反應(yīng)器時(shí)，應(yīng)使外源基因在小鼠的膀胱上皮細(xì)胞中特異表達(dá)．
（5）若使外源基因在乳腺細(xì)胞中表達(dá)，在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)必須加入乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子．啟動(dòng)子的作用是提供RNA聚合酶特異性識(shí)別結(jié)合位點(diǎn)，驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄．

Answer 1

分析 1、基因工程至少需要三種工具：限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）、DNA連接酶、運(yùn)載體．其中常用的運(yùn)載體：質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒．作為運(yùn)載體必須具備的條件：①要具有限制酶的切割位點(diǎn)； ②要有標(biāo)記基因（如抗性基因），以便于重組后重組子的篩選③能在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定存在并復(fù)制；④是安全的，對(duì)受體細(xì)胞無(wú)害，而且要易從供體細(xì)胞分離出來(lái)．
2、基因工程的基本操作步驟主要包括四步：
①目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
②基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
③將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
④目的基因的檢測(cè)與鑒定：（1）分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．（2）個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法．
（2）在基因工程中，由于受精卵或早期胚胎細(xì)胞具有全能性，可使外源基因在相應(yīng)組織細(xì)胞表達(dá)，因此進(jìn)行基因轉(zhuǎn)移時(shí)，通常要將外源基因轉(zhuǎn)入受精卵或早期胚胎中．
（3）檢測(cè)目的基因是否插入了小鼠的基因組通常采用DNA分子雜交技術(shù)．為了檢測(cè)生長(zhǎng)激素基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，可用標(biāo)記的生長(zhǎng)激素基因片段作探針與mRNA雜交，該雜交技術(shù)稱(chēng)為DNA-RNA分子雜交．為了檢測(cè)胰島素基因轉(zhuǎn)錄的mRNA是否翻譯成生長(zhǎng)激素，常用抗原-抗體雜交技術(shù)．
（4）在研制膀胱生物反應(yīng)器時(shí)，應(yīng)在目的基因前加膀胱組織特異性表達(dá)的啟動(dòng)子，使外源基因在小鼠的膀胱上皮細(xì)胞中特異表達(dá)．
（5）若使外源基因在乳腺細(xì)胞中表達(dá)，在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)必須加入乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子．啟動(dòng)子的作用是提供RNA聚合酶特異性識(shí)別結(jié)合位點(diǎn)，驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄．
故答案為：
（1）顯微注射法
（2）受精卵或早期胚胎細(xì)胞     受精卵或早期胚胎細(xì)胞具有全能性，可使外源基因在相應(yīng)組織細(xì)胞中表達(dá)
（3）DNA分子雜交  生長(zhǎng)激素基因      DNA-RNA分子雜交    生長(zhǎng)激素（蛋白質(zhì)）
（4）膀胱上皮    
（5）乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子       提供RNA聚合酶特異性識(shí)別結(jié)合位點(diǎn)，驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄

點(diǎn)評(píng) 本題以膀胱生物反應(yīng)器的制備為題材，考查基因工程和核移植的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的具體步驟及相關(guān)注意事項(xiàng)；識(shí)記核移植的概念，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題，屬于考綱識(shí)記和理解層次的考查．