Question

1．科學(xué)家利用土壤農(nóng)桿菌把編碼霍亂毒素的無毒性β鏈的基因轉(zhuǎn)移到苜蓿細(xì)胞，再將其培養(yǎng)成幼苗，食用這種苜蓿苗后，霍亂毒素β鏈很快被喉、腸胃等部位的分泌性粘液細(xì)胞吸收，刺激特異性抗體的大量產(chǎn)生，使機(jī)體獲得對霍亂的免疫．其具體過程如下：

（1）構(gòu)建重組DNA分子常用的工具酶是限制酶和DNA連接酶，基因工程中構(gòu)建基因表達(dá)載體的目的是使目的基因在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定地復(fù)制并表達(dá)．
（2）圖中過程②采用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，Ti質(zhì)粒上有一個tms片段能促進(jìn)生長素的大量合成，在對Ti質(zhì)粒改造時要將該片段去除，其原因是防止植物（苜蓿）體內(nèi)生長素濃度過高而抑制植物（苜蓿）生長．
（3）該實驗中將農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)入苜蓿細(xì)胞的原生質(zhì)體后，需再生細(xì)胞壁，實驗室檢測原生質(zhì)體是否再生出細(xì)胞壁的方法是將細(xì)胞置于高滲溶液中，觀察是否發(fā)生質(zhì)壁分離．
（4）含目的基因的苜蓿細(xì)胞通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)，經(jīng)過脫分化、再分化兩個重要階段能發(fā)育成幼苗．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）構(gòu)建重組DNA分子常用的工具酶是限制酶和DNA連接酶，基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心步驟，目的是使目的基因在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定地復(fù)制并表達(dá)．
（2）圖中過程②為目的基因?qū)�入的方法，采用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，Ti質(zhì)粒上有一個tms片段能促進(jìn)生長素的大量合成，在對Ti質(zhì)粒改造時要將該片段去除，其原因是  防止植物（苜蓿）體內(nèi)生長素濃度過高而抑制植物（苜蓿）也長．
（3）原生質(zhì)體長出細(xì)胞壁才會發(fā)生質(zhì)壁分離，故實驗室檢測原生質(zhì)體是否再生出細(xì)胞壁的方法是將細(xì)胞置于高滲溶液中，觀察是否發(fā)生質(zhì)壁分離．
（4）含目的基因的苜蓿細(xì)胞通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)，經(jīng)過分化、再分化兩個重要階段能發(fā)育成幼苗．

故答案為：
（1）限制酶和DNA連接酶   使目的基因在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定地復(fù)制并表達(dá)
（2）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法  防止植物（苜蓿）體內(nèi)生長素濃度過高而抑制植物（苜蓿）生長
（3）將細(xì)胞置于高滲溶液中，觀察是否發(fā)生質(zhì)壁分離
（4）脫分化   再分化

點評 本題考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)問題，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確判斷各選項．